臨床基因擴增檢驗的質量保證ppt97(1)(編輯修改稿)
2025-01-31 17:28 本頁面
【文章內容簡介】 應對試劑準備、標本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出 “標準操作程序 ”(SOP) 實驗室質量管理體系的建立n質量手冊n質量體系程序文件n標準操作程序質量管理的內涵n寫你所做的n做你所寫的n記錄你已做的怎樣編寫 SOP？人員培訓 n 臨床基因擴增檢驗的操作主要是標本處理中的核酸提取步驟， 這其中所涉及 的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡單， 但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測定結果，操作人員需要一定的專業(yè)技術知識和經驗，要盡可能做到知其然 又知其所以然。 核酸樣本的制備、擴增檢測及其質量控制n 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內釋出的原理n 核酸的分離純化n 靶核酸提取的質量 n 臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質 n 核酸樣本制備及擴增檢測的質控 n 產物檢測的質控 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內釋出的原理n 靶核酸可以與宿主細胞整合，核內游離及胞漿內各種構形存在于細胞內，如測定的是病原微生物 ,則靶核酸存在于細菌、病毒、原蟲或真菌細胞內，如果上述細胞破裂 ,則靶核酸亦可存在于細胞外。 n 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結合于核酸的蛋白質，從而將靶核酸從細胞內釋放出來。核酸的分離純化 n核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴增的物質去除。 n經典方法n硅吸附法n對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進行評價。 臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質 n 臨床標本中： 血清或血漿中的血紅素及其代謝產物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、 降解靶核酸的核酸 酶等 。n 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 對臨床標本中可能存在的抑制 /干擾物的質控措施n質控措施： 采用內質控（internal control, IC）（通常稱為內標）的方法 n內標有兩種 ,即競爭性的和非競爭性的內標。 n內標設置的必要性 ？統(tǒng)計學質量控制 n理想的室內質控樣本的條件n測定中質控樣本的設置、數量及排列順序 n統(tǒng)計學質控的特點 n統(tǒng)計質控方法理想的室內質控樣本的條件n 基質與待測樣本一致；n 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；n 穩(wěn)定；n 靶值或預期結果已定；n 無已知的生物傳染危險性；n 單批可大量獲得；n 價廉測定中質控樣本的設置、數量及排列順序n 每次檢測究竟使用幾個質控樣本并排在臨床標本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應每隔幾份臨床標本插入 1份質控樣本，但考慮國內目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴增檢驗的標本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質控樣本應可以滿足要求。而定量測定則要根據試驗的測定范圍，采用高、中、低三種濃度的質控樣本。至于在測定中的排列順序，可排于標準品或校準品之后，臨床樣本之前。 臨床基因擴增檢驗室內質控的獨特性n即監(jiān)測污染發(fā)生的陰性質控的設置。 n應該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴增反應混合液的管 。 陰性原血清質控樣本的功能 n監(jiān)測實驗室的以前擴增產物的污染； n由實驗操作所致的標本間的交叉污染 ；n擴增反應試劑的污染。 在標本核酸提取過程中帶入的一個空管 的功能n基本功能與陰性原血清質控樣本相同，但不同的是，其基質為水，不含陰性原血清質控樣本中可能有的擴增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏 ；n不能取代原血清陰性樣本 。僅含擴增反應混合液的管 的功能n 監(jiān)測擴增試劑是否發(fā)生污染，具有較強的污染鑒別性。n 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴增反應混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產物的存在。 統(tǒng)計學質控的特點 n 檢驗誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機誤差。n 系統(tǒng)誤差通常表現為質控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設備、試劑、標準品或校準物出現問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。n 隨機誤差則表現為測定 SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機因素所致，其出現難以完全避免和控制。統(tǒng)計學質控的功能n 統(tǒng)計學質控的功能就是發(fā)現誤差的產生及分析誤差產生的原因，采取措施予以避免。n 開展統(tǒng)計質量控制前，應將可以控制的誤差產生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內質控的前提，也是保證常規(guī)檢驗工作質量的先決條件。 統(tǒng)計質控方法 n 基線測定n 質控規(guī)則的表達方式及定義 n LeveyJennings質控圖方法 n LeveyJennings質控圖結合 Westgard多規(guī)則質控方法 n 累積和 (CUSUM) 質控方法 n “ 即刻法 ” 質控方法 基線測定n 最佳條件下的變異（ Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； n 當 RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時，則RCV是可以接受的。以上為 批間變異 。n 批內變異 的測定；n 室內質控物的 測定準確度 的評價。 臨床基因擴增檢驗 IQC統(tǒng)計計算問題n可使用質控樣本擴增后的 拷貝數/ml或 IU/ml來進行統(tǒng)計計算，也可
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