食品質(zhì)量檢驗(yàn)員培訓(xùn)資料(編輯修改稿)
2025-01-27 23:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 最大吸收峰。如用此波長測定鈷，則未反應(yīng)的顯色劑會造成干擾而降低測定的準(zhǔn)確度。因此，必須選擇在500nm波長處測定，在此波長下顯色劑不發(fā)生吸收，而鈷絡(luò)合物則有一吸收平臺。用此波長測定，靈敏度雖有所下降，卻消除了干擾，提高了測定的準(zhǔn)確度和選擇性。25紫外可見分光光度法 測量條件的選擇 ② 參比溶液的選擇； ③ 吸光度讀數(shù)范圍的選擇 參比溶液選擇原則如下： (1)如果僅待測物與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┳鲄⒈热芤骸?(2)如果顯色劑或其他試劑有吸收，應(yīng)用空白溶液 (不加試樣的溶液 )作參比溶液。 總原則是使試液的吸光度真正反映待測物的濃度。 吸光度在 ～ 誤差最小。 為使被測溶液的吸光度在 ～ ，可以用下面方法來調(diào)整。 (1)控制被測溶液的濃度。 (2)選擇不同的比色皿。26紫外可見分光光度法的定量方法 紫外可見分光光度分析的定量依據(jù)是光吸收定律。常用的定量方法有三種，即 : 標(biāo)準(zhǔn)曲線法； 直接比較法； 標(biāo)準(zhǔn)加入法。27紫外可見分光光度法的定量方法 ：也稱工作曲線法，適用于大量重復(fù)的樣品分析，是應(yīng)用最多的方法。 根據(jù)光吸收定律，對于一種有色化合物， ε是一個定值，若把光程 L也固定，那么吸光度 A就和溶液的濃度成正比，也就是說吸光度 A和濃度 c呈線性關(guān)系。配制一系列適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色后分別測定其吸光度，把吸光度 A對濃度 c作圖，即得工作曲線。然后將被測組分在同樣條件下顯色，測得吸光度后在工作曲線上查得被測組分的濃度。 這個方法簡單方便，適用于多個樣品的系列分析。28紫外可見分光光度法的定量方法 2．直接比較法 直接比較法的實(shí)質(zhì)也是工作曲線法，是一種簡化的工作曲線法。 配一個已知被測組分濃度為 Cs的標(biāo)樣，測其吸光度為 As，在同樣條件下再測未知品的吸光度為 Ax，通過比例計(jì)算可求出未知樣品的濃度 Cx。 直接比較法簡化了繪制工作曲線的步驟，適用于個別樣品的測定。操作時應(yīng)注意配制標(biāo)樣的濃度要接近被測樣品的濃度，這樣能減少測量誤差。29紫外可見分光光度法的定量方法 3．標(biāo)準(zhǔn)加入法 標(biāo)準(zhǔn)加入法是工作曲線法的一種特殊應(yīng)用。選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件，先測定濃度為 Cx的未知樣品吸光度為 Ax，再向未知樣品中加入一定量的標(biāo)樣，配成濃度為 Cx+△ C Cx+△ C2…一系列樣品，分別顯色后再測定吸光度為 A A2… 最后在坐標(biāo)紙上畫圖，以吸以為縱坐標(biāo)，以濃度 C為橫坐標(biāo)，分別畫出 △ C1 、 △ C2所對應(yīng)的 A A2等各點(diǎn)，連成直線后延長，與橫軸的交點(diǎn) Cx。也就是未知樣品的濃度 Cs。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)加入法時要注意，加入的標(biāo)樣濃度要適當(dāng)，使畫出的曲線保持適當(dāng)角度，濃度過大或過小都會帶來測量誤差。 這種方法操作比較麻煩，不適于作系列樣品分析，但它適用于組成比較復(fù)雜，干擾因素較多而又不太清楚的樣品，因?yàn)樗芟尘暗挠绊憽?0紫外可見分光光度法 操作注意事項(xiàng)
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