【文章內(nèi)容簡介】 達(dá)不到人體推薦量的 100倍，按實(shí)際達(dá)到的倍數(shù) 標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù)樣品的預(yù)處理原則 在進(jìn)行 Ames試驗(yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)時需將受試物滅活。 需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術(shù)參數(shù)）。 （ 1）有營養(yǎng)價值：按設(shè)計量進(jìn)行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細(xì)的說明。 （ 2）大豆蛋白、乳清蛋白 如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。 如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學(xué)試驗(yàn)。毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介紹q 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)q 鼠傷寒沙門氏菌（ Ames）試驗(yàn)q 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)q 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)q 小鼠精子畸形試驗(yàn)q 小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn)q 30天喂養(yǎng)試驗(yàn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)康模?測定 LD50，毒性分級。了解毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供劑量和觀察指標(biāo)的選擇依據(jù)。原理：急性毒性：經(jīng)口一次性、 24h內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量 LD50表示。急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標(biāo)準(zhǔn)來確定這三種不同的作用。急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)時間周期 ：一般為 3周 35天，大、小鼠適應(yīng)期 714天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期 發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進(jìn)行大體解剖觀察和評價指標(biāo) ：毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)生死亡動物急性毒性（ LD50）劑量分級表級 別 大鼠口服 LD50， mg/kg相當(dāng)于人的致死量mg/kg g/人極毒 1 稍嘗 劇毒 150 5004000 中等毒 51500 400030000 5低毒 5015000 30000250000 50實(shí)際無毒 500115000 250000500000 500無毒 15000 500000 2500急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果的判定：1. LD50＜人可能攝入量的 100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗(yàn)。2. LD50≥10g/kgbw 或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗(yàn)。鼠傷寒沙門氏菌（ Ames）試驗(yàn)?zāi)康模?檢測受試物的誘變性，預(yù)測其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。 時間周期： 一般為 2周 第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備 第二周，染毒，培養(yǎng) 48h，讀平板，菌落計數(shù)劑量設(shè)計： 決定受試物最高劑量的因素是對細(xì)菌的毒性及其溶解度。最低劑量為 ；最高劑量為 5mg/皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個劑量組，組間距不超過 5倍。同時設(shè)：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。鼠傷寒沙門氏菌（ Ames）試驗(yàn)觀察及評價指標(biāo)： 各受試物組及三個對照組的四種菌株（ TA97a， TA98， TA100和 TA102）分別在加和不加 S9情況下的菌落計數(shù)。結(jié)果評價（摻入法）： 受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)≥2 未處理對照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)的陽性反應(yīng)，即可判試驗(yàn)陽性。骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)?zāi)康?：檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變的可能性。原理 ：微核是在細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞形成細(xì)胞核時，仍然留在細(xì)胞質(zhì)中的色單體或染色體的無著絲點(diǎn)斷片 。末期之后，單獨(dú)形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)時間周期 ：一般為 2周 35天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口染毒， 30h給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢劑量設(shè)計 ：至少設(shè)置 3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴(yán)重中毒表現(xiàn)和 /或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。一般取 LD50的 1/ 1/ 1/8作為三個劑量。當(dāng)受試物的 LD50≥10g/ 時，最高劑量通常采用 10g/。同時設(shè)陽性對照組和溶劑對照組。骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)觀察及評價指標(biāo) ：每只動物計數(shù) 1000個嗜多染紅細(xì)胞 ，記錄含有微核的細(xì)胞數(shù)，并計算微核千分率。觀察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比例。 結(jié)果評價 ：受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)?zāi)康?：檢測受試物對整體動物骨髓細(xì)胞染色體畸變的致突變性，以評價其致突變的可能性。原理 ：當(dāng)受試物作用于細(xì)胞周期 G1期和 S期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于 G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時紡錘體的形成，增加中期分裂相細(xì)胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)時間周期 ：一般為 3周 35天適應(yīng)期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒 24次，每次間隔 24h，在末次染毒 1824h進(jìn)行取材（取材前 24h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢劑量設(shè)計 ：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)觀察及評價指標(biāo) ：每只動物分析 100個中期相細(xì)胞 ，每個劑量組不少于1000個。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果評價 ：受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。小鼠精子畸形試驗(yàn)?zāi)康?：檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體內(nèi)生殖細(xì)胞的致突變作用。原理 ：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及 X、 Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。小鼠精子畸形試驗(yàn)時間周期 ：一般為 7周 35天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒 5天，于首次給樣后的 35天處死動物 取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢劑量設(shè)計 ：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)小鼠精子畸形試驗(yàn)觀察及評價指標(biāo) ：每只動物檢查 1000個精子 ，記錄精子畸形數(shù)目及類型。結(jié)果評價 ：受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。小鼠睪丸染色體畸變試驗(yàn)?zāi)康?：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細(xì)胞的致突變性。