分子雜交及生物芯片技術(編輯修改稿)
2025-01-15 03:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 交技術 分子雜交技術 探針 ? ?32P dNTP結構 A、 G 、 C或 T N H H P P 32P O O O O O OH OH OH HO O OH H H H OCH2 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 探針 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 探針 ? 探針標記 ? 隨機引物法 ? 缺口平移法 (DNaseI and DNA聚合酶 I) ? 末端標記法 ? 堿性磷酸酶 T4多核苷酸激酶 [γ32p]ATP標記 DNA/RNA5′ ? 末端轉移酶（ poly(N*)n） ? T4DNA聚合酶 /Klenow片斷 （粘末端補平） 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 探針 ? 探針純化 ? 乙醇沉淀法 ? 凝膠過濾法 （ G50 Spin column） 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 ? 印跡（轉膜）支持物： ? 硝酸纖維素膜（ NC膜） ? 尼龍膜 ? N+nylon （ DNA/RNA） ? 中性膜 ? PVDF膜（ western blot） 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 ? 印跡（轉膜）方法： ? 毛細管虹吸轉移法 ? 真空轉移法 ? 電轉移法 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 濕濾紙 緩沖液 濾紙橋 凝膠 硝酸纖 維素膜 吸水紙 玻璃板 支持臺 容器 重物 ? 毛細管虹吸轉移法 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 尼龍膜 凝膠 濾紙 海綿 凝膠支持夾 緩沖液 電極 + – 濾紙 電極 ? 電轉移法 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 ? 真空轉移法 1h 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 真空轉移裝置 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 印跡 ? Western blot (SDSPAGE及轉膜系統(tǒng) ) 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 分子雜交技術 — 影響因素 ? 離子強度 (高 消除靜電斥力 利于雜交 ) ? 溫度 （低于 Tm 2025℃ ） ? 有機試劑（去離子甲酰胺） 降低 Tm ? 樣品 /探針分子的大小和復雜程度 ? 洗滌條件 （ 高嚴謹性，洗去非特異性結合探針） ? 支持物 ? 添加物 （ 吸附 DNA探針，使 DNA接觸面增大 ） 厚德 博學 精誠 濟世 分子生物學 第五章 分子雜交技術 預雜交 為減少探針與廣泛存在的非互補核酸的非特異性結合，雜交前用封閉物將這些非特異位點封閉。 ? 變性的非特異性 DNA：常用鮭魚精子 DNA或小牛胸腺 DNA。當與濾膜一起孵育后，除濾膜上已吸附樣品 DNA的區(qū)域外，它們可被吸附到所有其它區(qū)域，使整個背景覆蓋一層。由于它們與探針無同源性，在交雜反應中可大大減少探針的非特異性結合，使背影清晰。 ? 高分子化合物：某些
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