分子生物學技術之dna重組技術(編輯修改稿)
2025-02-12 20:09 本頁面
【文章內容簡介】 322質粒載體由三個不同來源的部分組成的：第一部分來源于 pSF2124質粒易位子 Tn3的氨芐青霉素抗性基因（ AmpR）；第二部分來源于 pSC101質粒的四環(huán)素抗性基因（ tetr）；第三部分則來源于 ColE1的派生質粒 pMB1的DNA復制起點（ ori）。AmpR優(yōu)點是具有較小的分子量，其長度為 4 363bp。不僅易于純化，而且即使攜帶上一段 68kb的外源 DNA片段，操作起來仍較為便利。具有兩種抗生素抗性基因以用作轉化子的選擇記號。 有較高的拷貝數(shù)，若經(jīng)過氯霉素擴增，每個細胞中可累積 1000~3000個拷貝，為重組體DNA的制備提供了極大的方便。 pUC質粒載體（包括四個部分）：(i)來自 pBR322質粒的復制起點（ ori）；(ii)氨芐青霉素抗性基因（ ampr）；(iii)大腸桿菌 β半乳糖酶基因（ lacZ）的啟動子及其編碼 α肽鏈的 DNA序列，此結構特稱為 lacZ’基因；(iv)位于 lacZ ’基因中的靠近 5’端的一段多克隆位點（ MCS）區(qū)段，外源基因插入后破壞了 lacZ ’基因的功能。優(yōu)點： 更小的分子量和更高的拷貝數(shù)。在 pBR322基礎上構建 pUC質粒載體時，僅保留下其中的氨芐青霉素抗性基因及復制起點，其分子小了許多， pUC8為 2750bp， pUC18為 2686bp。由于缺失 rop基因， pUC質粒不經(jīng)氯霉素擴增時，平均每個細胞即可達 500~700個拷貝 ?？捎媒M織化學方法檢測重組體。 pUC8質粒結構中具有來自大腸桿菌 lac操縱子的 lacZ‘基因，所編碼的 α肽鏈可參與 α互補作用。因此，可用 Xgal顯色法實現(xiàn)對重組體轉化子的鑒定。具有多克
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