分子生物學(xué)技術(shù)之dna重組技術(shù)(編輯修改稿)
2025-02-12 20:09 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 322質(zhì)粒載體由三個(gè)不同來源的部分組成的：第一部分來源于 pSF2124質(zhì)粒易位子 Tn3的氨芐青霉素抗性基因（ AmpR）；第二部分來源于 pSC101質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因（ tetr）；第三部分則來源于 ColE1的派生質(zhì)粒 pMB1的DNA復(fù)制起點(diǎn)（ ori）。AmpR優(yōu)點(diǎn)是具有較小的分子量，其長度為 4 363bp。不僅易于純化，而且即使攜帶上一段 68kb的外源 DNA片段，操作起來仍較為便利。具有兩種抗生素抗性基因以用作轉(zhuǎn)化子的選擇記號(hào)。 有較高的拷貝數(shù)，若經(jīng)過氯霉素?cái)U(kuò)增，每個(gè)細(xì)胞中可累積 1000~3000個(gè)拷貝，為重組體DNA的制備提供了極大的方便。 pUC質(zhì)粒載體（包括四個(gè)部分）：(i)來自 pBR322質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)（ ori）；(ii)氨芐青霉素抗性基因（ ampr）；(iii)大腸桿菌 β半乳糖酶基因（ lacZ）的啟動(dòng)子及其編碼 α肽鏈的 DNA序列，此結(jié)構(gòu)特稱為 lacZ’基因；(iv)位于 lacZ ’基因中的靠近 5’端的一段多克隆位點(diǎn)（ MCS）區(qū)段，外源基因插入后破壞了 lacZ ’基因的功能。優(yōu)點(diǎn)： 更小的分子量和更高的拷貝數(shù)。在 pBR322基礎(chǔ)上構(gòu)建 pUC質(zhì)粒載體時(shí)，僅保留下其中的氨芐青霉素抗性基因及復(fù)制起點(diǎn)，其分子小了許多， pUC8為 2750bp， pUC18為 2686bp。由于缺失 rop基因， pUC質(zhì)粒不經(jīng)氯霉素?cái)U(kuò)增時(shí)，平均每個(gè)細(xì)胞即可達(dá) 500~700個(gè)拷貝 ?？捎媒M織化學(xué)方法檢測(cè)重組體。 pUC8質(zhì)粒結(jié)構(gòu)中具有來自大腸桿菌 lac操縱子的 lacZ‘基因，所編碼的 α肽鏈可參與 α互補(bǔ)作用。因此，可用 Xgal顯色法實(shí)現(xiàn)對(duì)重組體轉(zhuǎn)化子的鑒定。具有多克
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