醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)蛋白質(zhì)(編輯修改稿)
2025-01-19 02:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 子交換劑：離子交換層析所用的固相基質(zhì)，由不溶于水的、具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子聚合物組成。3/5/2023 303/5/2023 31離子交換層析的操作樣品的準(zhǔn)備：固體樣品必須溶于適當(dāng)離子強(qiáng)度和 pH的緩沖液中。組織液或細(xì)胞裂解液用緩沖液稀釋后可直接上柱。鹽析樣品必須除鹽后才能進(jìn)行分離。離子交換劑的處理：根據(jù)被分離樣品的性質(zhì)選擇合適的離子交換劑，離子交換劑在使用前須先進(jìn)行處理。3/5/2023 32層析柱的準(zhǔn)備：離子交換層析柱一般選擇粗短柱為宜，使得樣品在分離的同時(shí)進(jìn)行濃縮。離子交換劑的用量根據(jù)樣品量和交換劑的交換容量確定。樣品分離：上樣量的多少與目的蛋白的性質(zhì)、濃度及交換劑的親和力有關(guān)。在分離過程中，應(yīng)注意3/5/2023 331）樣品的濃度不宜過大2）溶解蛋白質(zhì)樣品的緩沖液的離子強(qiáng)度要低于起始緩沖液3）上樣速度不要過快4）上樣緩沖液的 pH應(yīng)合適洗脫3/5/2023 34洗脫液的鑒定和回收離子交換劑的再生與儲存3/5/2023 353/5/2023 36兔 γ－球蛋白的木瓜蛋白酶水解物在 CM纖維素柱上的層析分離3/5/2023 37天花粉各成分用特種離子交換劑層析分離3/5/2023 383/5/2023 393/5/2023 40二、分子篩原理3/5/2023 413/5/2023 423/5/2023 43凝膠過濾的分配系數(shù) K= (VeV0) (Vi)3/5/2023 44主要凝膠過濾介質(zhì)的牌號及骨架結(jié)構(gòu)3/5/2023 45葡聚糖凝膠 (G)型號分離范圍 (分子量 ) 吸水量 (克／克干凝膠 )膨脹體積(毫升／克干凝膠)浸泡時(shí)間蛋白質(zhì) 多糖 20～25℃90~100 ℃10 700 700 23 3 115 1500 1500 3 125 10005000 1005000 46 3 150 150030000 50010000 911 3 175 300070000 100050000 1215 24 3100 4000150000 1000100000 10 1520 72 5150 5000400000 1000150000 15 2030 72 5200 5000800000 1000202300 20 3040 72 53/5/2023 46親和層析：利用生物分子間特殊的親和關(guān)系進(jìn)行的分離方法。是蛋白質(zhì)分離純化的最有效的方法之一，有時(shí)甚至可以僅用一步純化即可達(dá)到純化目的。只要被分離蛋白、配基和載體之間能形成以下的關(guān)系，即可進(jìn)行親和層析3/5/2023 473/5/2023 48基本原理：親和層析法利用了生命現(xiàn)象中生物分子之間非常特異的相互作用而進(jìn)行分離純化的方法。生物體內(nèi)能發(fā)生特異的相互作用的成分有：酶與酶的底物酶與酶的抑制劑酶與酶的變構(gòu)效應(yīng)劑酶與酶的輔酶激素與細(xì)胞膜上的受體維生素與結(jié)合蛋白核酸抗原與抗體外源凝集素與紅細(xì)胞表面的抗原3/5/2023 49特異性強(qiáng)分辨率高回收率高層析柱的再生方便親和層析特點(diǎn) 特別適用于微量生物活性物質(zhì)的分離3/5/2023 50? 電泳 是指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象 ? 正極 負(fù)極帶負(fù)電粒子帶正電粒子蛋白質(zhì)的電泳分離3/5/2023 51+++ ++++ + +++ ++++ + 蛋白質(zhì)膠體顆粒的沉淀 帶正電荷的蛋白質(zhì) 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)酸酸堿堿脫水 脫水脫水不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒 （沉淀）帶正電荷的蛋白質(zhì) （疏水膠體）帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) （疏水膠體）堿 酸（親水膠體）（親水膠體） （親水膠體）3/5/2023 52 帶電顆粒在電場中所受到的電場力 F=EQ 根據(jù) Stoke定律，球形分子在液體中泳動所受到的阻力 F’=6πrηv電泳原理：3/5/2023 53 F=F’即： EQ= 6πrηv 時(shí)，V=EQ6πrη 當(dāng)物質(zhì)在電場中移動時(shí)，受到電場力和液體阻力兩方面的力的影響，當(dāng)電場力和阻力平衡時(shí)，帶電顆粒作勻速運(yùn)動，3/5/2023 54 兩個(gè)帶電顆粒能否分開，由兩個(gè)顆粒在電
高考資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1