分子生物學技術(shù)之dna重組技術(shù)-閱讀頁
2025-02-04 20:09本頁面
【正文】 操縱子的 lacZ‘基因，所編碼的 α肽鏈可參與 α互補作用。具有多克隆位點 MCS區(qū)段，可以把具兩種不同粘性末端（如 EcoRI和 BamHI）的外源 DNA片段直接克隆到 pUC8質(zhì)粒載體上?；?。加入 T7或 SP6 RNA聚合酶，所克隆的外源基因便會轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的 mRNA。由于這類質(zhì)粒載體可以保證外源 DNA序列在不同物種的細胞之間得到擴增，能在原核和真核細胞之間往返穿梭，具有廣泛的用途。? SK表示多克隆位點區(qū)的取向，即 lacZ基因是按照 SacI→KpnI 的方向轉(zhuǎn)錄；? （ +/ ）表示單鏈噬菌體 f1復(fù)制起點的兩種相反的取向。(i)在多克隆位點區(qū)（ MCS）的兩側(cè)，存在一對T3和 T7噬菌體的啟動子，用以定向指導(dǎo)插入在多克隆位點上的外源基因的轉(zhuǎn)錄活動；(ii)具有單鏈噬菌體 M13或 f1的復(fù)制起點和一個來自 ColE1質(zhì)粒的復(fù)制起點，保證 pBluescript噬菌粒載體在有或無輔助噬菌體共感染的不同情況下，按照不同的復(fù)制形式分別合成出單鏈或雙鏈 DNA；(iii）編碼有一個氨芐青霉素抗性基因，作為轉(zhuǎn)化子克隆的選擇標記；(iv)含有一個 lacZ基因，可以按照 XgalIPTG組織化學顯色法篩選噬菌粒載體的重組子。重組 DNA操作過程示意圖圖 52 DNA連接酶能把不同的 DNA片段連接成一個整體 僅僅能在體外利用限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA連接酶進行 DNA的切割和重組，還不能滿足基因工程的要求，只有將它們連接到具備自主復(fù)制能力的 DNA分子上，才能在寄主細胞中進行繁殖。病毒、噬菌體和質(zhì)粒等小分子量復(fù)制子都可以作為基因?qū)氲妮d體。 圖 53 重組 DNA操作過程示意圖 演講完畢，謝謝觀看！
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