生物顯微技術第五章原位雜交(編輯修改稿)
2025-02-12 18:45 本頁面
【文章內容簡介】 5℃) 非苛刻復性溫度： Tns =Tm – (30或 35℃) ? Tm＝ 79． 8一 D十 ％ GC十 16 lg[Na＋ ]一 F (％formamine)一 L ? D：是用來校正各種不同類型雜交體熱穩(wěn)定性的差別系數。 DNA： DNA 10 DNA： RNA 5 RNA： RNA 0 ? ％ GC：雜交體中 G十 C堿基的百分比。 ? [Na＋ ]：雜交液中單價陽離子的摩爾濃度。 ? F：是由甲酰胺引起的 Tm下降常數，在 DNA： DNA、DNA： RNA和 RNA： RNA雜交中， F值分別為 、 。 ? (％ formamine)：雜交液中甲酰胺的百分比濃度。 L用以校正雙鏈長度對 Tm的影響。雜交體雙鏈的熱穩(wěn)定性隨著其長度的縮短而降低。 L值可用公式計算： L＝ B／ I。其中 B＝ 300十 2022[Na＋ ]( Na＋應為 )， I為雙鏈的長度，用 bp表示。 ? 雜交的溫度 時間： 16－ 20小時 ? 探針的濃度 ： 應用最低探針濃度以達到與靶核苷酸的最大飽和結合度。 雜交后處理 ? 洗滌 ? RNAase消化并洗滌 使用地高辛標記的RNA探針的冰凍切片的原位雜交 實驗準備 ? 玻璃儀器的處理：洗液、堿過夜、自來水、蒸餾水、 180℃ 滅菌 6小時。 ? 塑料器皿的處理： DEPC處理 ? 藥品的配制：藥品專用、必要時 DEPC處理 ? 載片的處理：清潔如玻璃儀器 硅化
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