第六節(jié)植物克隆載體(編輯修改稿)
2024-10-27 15:39 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 DNA， 8個(gè) ORF，致死，最多可容納 800bp外源 DNA，只能用語(yǔ)作短暫表達(dá) (transient expression) 2) 雙生病毒： ,環(huán)狀 ssDNA，可感染單子葉植物，短暫表達(dá)。 2. RNA病毒載體 BMV（雀麥花葉病毒）和 TMV載體優(yōu)點(diǎn)： 1）轉(zhuǎn)化頻率高 。 2）宿主范圍廣 。 3）高拷貝，外源基因高效表達(dá)。 第 七 節(jié) 動(dòng)物分子克隆載體 一 . 構(gòu)建動(dòng)物克隆載體的病毒種類(lèi)和特征 病毒類(lèi)型 例子 病毒大小 (nm) 基因組結(jié)構(gòu) 基因組大小 (kb) 細(xì)小病毒 野生型 H1,RV,MVM 20 ssDNA 缺陷型 AAV 乳多空病毒 乳實(shí)瘤 兔 ,人 (BPV) 3050 環(huán)狀 dsDNA 多型瘤 小鼠腫瘤 空泡 SV40， BKV 腺病毒 人 (AD) 8090 dsDNA 3040 皰疹病毒 HSV,EBV 100150 dsDNA 80140 痘病毒 300 200 100 dsDNA 240300 逆病毒 MLV,MSV 100120 ssRNA 二 . 病毒型載體 1. 特點(diǎn) 1) 可在動(dòng)物細(xì)胞中形成病毒顆粒（形態(tài)構(gòu)成組分來(lái)自天然病毒或原病毒細(xì)胞） 2) DNA轉(zhuǎn)移效率高，但必須與天然 (輔助 )病毒共感染動(dòng)物細(xì)胞 3) 大多數(shù)被感染動(dòng)物細(xì)胞將是致死的，但有少數(shù)病毒（如逆病毒）載體可穩(wěn)定整合到染色體 DNA中。 4) 插入病毒載體的外源基因只能在動(dòng)物細(xì)胞中作瞬時(shí)表達(dá) 2. 載體種類(lèi) 根據(jù)構(gòu)建載體的病毒基因大小可分為兩類(lèi)： 1） 復(fù)制型 ：由小分子病毒 DNA 構(gòu)建而成，具復(fù)制起點(diǎn)，其克隆位點(diǎn)可在病毒 DNA之內(nèi)，亦可在病毒 DNA之外，這類(lèi)載體有的容量十分有限（如 SV40），有的則很大（如HSV），其容量大小主要取決于病毒外殼蛋白的包裝能力。 2） 非復(fù)制型 ：這類(lèi)載體是在細(xì)菌克隆載體中插入一段病毒 DNA（不含復(fù)制起點(diǎn)）。當(dāng)外源 DNA插入該載體后，與相應(yīng)的天然病毒一起感染動(dòng)物細(xì)胞，外源 DNA可借助兩病毒 DNA同源部分的重組插入天然病毒。這類(lèi)載體特別適合于那些較大的病毒 DNA分子。 實(shí)例 ：痘病毒長(zhǎng) 180kb,編碼 150多種多肽，整個(gè)生存階段均在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，它能合成 DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后修飾的各種酶類(lèi)，由此病毒構(gòu)建的非復(fù)制型載體就是在細(xì)菌載體中插入一段痘病毒 DNA. 三 . 質(zhì)粒型載體 1. 特點(diǎn) ： 不能形成病毒顆粒，以高拷貝質(zhì)粒形式存在于動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，不導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞死亡。 2. 組成 ： pMB1和病毒復(fù)制起點(diǎn)（如 SV40， BPV， EBV等），適合于細(xì)菌和動(dòng)物細(xì)胞的選擇標(biāo)記基因。 3. 實(shí)例 1) SV40質(zhì)粒載體 SV40具如下物理圖譜， 5243bp, 為兩種抗原（ T和 t抗原）和三種病毒衣殼蛋白編碼。其中 T抗原參與 SV40的有效感染，并能特異地結(jié)合在病毒 DNA復(fù)制起點(diǎn)上，這種結(jié)合對(duì) DNA復(fù)制是必須的。因復(fù)制
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