第六節(jié)植物克隆載體(參考版)
2024-10-11 15:39本頁面
【正文】 前體 X MP G MPA MP腺嘌呤霉酚酸黃嘌呤次黃嘌呤 鳥嘌呤氨基嘌呤脫氨酶I M P Tn 5的氨基糖 ― 3’磷酸轉(zhuǎn)移酶基因可抗 neomycin， Kanamycin， G418（抑制真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成） , 潮霉素抗性基因等。DNAm R N ASDSAPI RE SI R ESInte r n a l R ib o s o m e Entry S iteApr o r i逆病毒的結(jié)構(gòu)和載體結(jié)構(gòu) 3. 昆蟲核型多角體病毒載體 該類病毒載體是病毒整合型表達(dá)載體，具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1）外源基因可獲得高表達(dá)： 1500mg/L 培養(yǎng)物 2）表達(dá)產(chǎn)物仍具有生物學(xué)活性 3）重組效率高 BacPAK6Viral DNATransfer VectorTarget genecDNACotransfectintoinsect cellsIncubate 23 daysHarvest virusPlate to obtain individualplaques (optional)Infect insect cells(largescale)Amplify virusTiter amplified virus(remended)Harvest expessedproteinFigure BacPAK Baculovirus System.昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) B a c P A K 6 ( 1 3 7 k b )O R F 1 6 2 9O R F 6 0 3l a c ZB s u 3 6 1B s u 3 6 1B s u 3 6 1o r i2 0 9 9 b pA c M N P V S V 4 02 4 9 3 b pA c M N P VM 1 3 o r ip A c U W 3 1 8 . 5 k bP o l y A+Pp 1 0Pp o l y h e d r i nP o l y A+S i g n a lA m prM 1 3 o r i1 4 3 3 b pA c M N P Vo r i 1 2 5 0 b pA c M N P Vp B a c PA K 8 / 9 5 . 5 k bPp o l y h e d r i nP o l y A+S i g n a lAmpr昆蟲桿狀病毒的 轉(zhuǎn)移載體和表達(dá)載體 三 . 標(biāo)記基因 1. tk基因和 dhfr基因 (胸苷激酶和二氫葉酸還原酶基因 ) 需相應(yīng)的突變體 2. gpt基因（來自 ） 非轉(zhuǎn)化細(xì)胞可生長在加有氨基喋呤和霉酚酸，腺嘌呤的培養(yǎng)基中。+RU5 U3 R e n v AAAA 339。 在 內(nèi)啟動子載體 中 , 兩基因各有自己的啟動子 iii. 自失活載體 (selfinactivation vector) iv. 自主復(fù)制載體 (replicationpetent vector) 2. 痘病毒克隆載體 將痘病毒的部分 DNA插入細(xì)菌載體中 , 借助同源序列的重組作用整合到病毒基因組中 U3 R U5U3 R U5U3 R U5U3 R U5 g a g p o l e n v PB(+)SDS
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