第六節(jié)植物克隆載體-文庫(kù)吧資料
2024-10-13 15:39本頁(yè)面
【正文】 AΨ PB()RU5 U3 R g a g p o l e n v Ψ AAAA 339。 在 剪接載體 中 , 逆病毒的 LTR序列和剪接位點(diǎn)保留 , 兩基因共用一個(gè)啟動(dòng)子和翻譯起始區(qū) 。 內(nèi)啟動(dòng)子載體 。 pol—反轉(zhuǎn)錄酶 /整合酶 。 BPV1( 7 9 5 6 b p )L1L2E1E269THBpBPVtk( 1 1 . 6 k b )BPV質(zhì)粒載體 三 . 整合型載體 這類載體可借助同源重組作用使外源基因插入染色體或病毒基因組中。 SV 4 0T 抗原t 抗原VP2VP3VP1ORB Ep34 2 E( 4 . 9 k b )H B S A gAprSV40質(zhì)粒載體 2) BPV1質(zhì)粒載體 BPV1中 69T是轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞所必需的 , 約占該病毒 DNA總長(zhǎng)的 69%, 單向轉(zhuǎn)錄。因復(fù)制起點(diǎn)與該基因的啟動(dòng)子順序相近，故它本身的表達(dá)也受到 T抗原的控制。 3. 實(shí)例 1) SV40質(zhì)粒載體 SV40具如下物理圖譜， 5243bp, 為兩種抗原（ T和 t抗原）和三種病毒衣殼蛋白編碼。 實(shí)例 ：痘病毒長(zhǎng) 180kb,編碼 150多種多肽，整個(gè)生存階段均在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，它能合成 DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后修飾的各種酶類，由此病毒構(gòu)建的非復(fù)制型載體就是在細(xì)菌載體中插入一段痘病毒 DNA. 三 . 質(zhì)粒型載體 1. 特點(diǎn) ： 不能形成病毒顆粒，以高拷貝質(zhì)粒形式存在于動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，不導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞死亡。當(dāng)外源 DNA插入該載體后，與相應(yīng)的天然病毒一起感染動(dòng)物細(xì)胞，外源 DNA可借助兩病毒 DNA同源部分的重組插入天然病毒。 4) 插入病毒載體的外源基因只能在動(dòng)物細(xì)胞中作瞬時(shí)表達(dá) 2. 載體種類 根據(jù)構(gòu)建載體的病毒基因大小可分為兩類： 1） 復(fù)制型 ：由小分子病毒 DNA 構(gòu)建而成，具復(fù)制起點(diǎn)，其克隆位點(diǎn)可在病毒 DNA之內(nèi)，亦可在病毒 DNA之外，這類載體有的容量十分有限（如 SV40），有的則很大（如HSV），其容量大小主要取決于病毒外殼蛋白的包裝能力。 3）高拷貝，外源基因高效表達(dá)。 2. RNA病毒載體 BMV（雀麥花葉病毒）和 TMV載體優(yōu)點(diǎn)： 1）轉(zhuǎn)化頻率高 。轉(zhuǎn)移過(guò)程： pBIN19 TDNA進(jìn)入植物細(xì)胞 該系統(tǒng)的最終轉(zhuǎn)化頻率比 SEV系統(tǒng)高得多 3） 標(biāo)記基因 生化標(biāo)記基因 ：冠癭堿合成酶基因（ NOS， OCS） lacZ, CAT, 熒光酶基因， GUS 藥物抗性標(biāo)記基因 ：除草劑耐受性基因， CHMTⅡ （金屬巰蛋白基因）， Bleomycin， Hgyr， SPT, DHFR, NPTⅡ (Kanr, G418r) 標(biāo)記基因常用的啟動(dòng)子有 CaMV 35S,OCS,NOS等。 iii)雙末端載體 (binary vector) 該類載體的顯著特點(diǎn)是含有兩個(gè) TDNA末端，所有需要轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中去的序列都位于其間。 5 7 i a a H i a a M i p t 6 a 6 b OCSNOSacs 魚(yú)堿型T D N A胭脂堿型T D N ATi質(zhì)粒的 TDNA的同源性 2. Ti質(zhì)粒載體 1) Ti質(zhì)粒作為載體的問(wèn)題 i) 太大，無(wú)適合克隆位點(diǎn) ii)T
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