蛋白質(zhì)分子凝聚從溶液中析出及現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)沉淀(編輯修改稿)
2025-09-19 16:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 心超濾管又挺貴。親和柱和抗體吸附蛋白不是不可以，成本更是貴的嚇人，親和柱都在300 RMB一支以上。做蜂王漿的獸藥檢測(cè)，建議采用SPE處理，適用得多。 8hmzhou83 回復(fù)于：2008418 9:22:46原文由 cuiyanhu 發(fā)表:我在做蜂王漿的前處理,我做沉淀蛋白,但還不給用破壞蛋白的方法,誰的沒有高招,請(qǐng)指點(diǎn)一二,在下非常感謝!!!!!!!!!!! 不知你最終研究的物質(zhì)是什么？里面的活性蛋白？建議你用NH4SO4或者乙醇處理。建議濃度階梯增加，逐層取出沉淀物質(zhì)，因?yàn)槔锩娑嗵潜容^多（慢慢會(huì)出現(xiàn)漂浮物質(zhì)），這樣可以略微好一些。不過NH4SO4不能保證所有的蛋白都能 沉下來，活性也不能保證完全。目前還沒有萬能的純化蛋白的方法。對(duì)于不同性質(zhì)的蛋白需要不同的嘗試。 9yulifairy 回復(fù)于：2008418 13:20:14原文由 cuiyanhu 發(fā)表:我在做蜂王漿的前處理,我做沉淀蛋白,但還不給用破壞蛋白的方法,誰的沒有高招,請(qǐng)指點(diǎn)一二,在下非常感謝!!!!!!!!!!! 可以用飽和硫酸銨試一試. 10happyjyl 回復(fù)于：2008418 13:29:13樓主是想制備不含蛋白質(zhì)的樣品溶液吧？下面是網(wǎng)上搜來的，供你參考。蛋白質(zhì)分子凝聚從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)沉淀(precipitation)，變性蛋白質(zhì)一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質(zhì)沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質(zhì)也可不發(fā)生沉淀。蛋白質(zhì)所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩(wěn)定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無外加條件，不致互相凝集。然而除掉這兩個(gè)穩(wěn)定因素(如調(diào)節(jié)溶液pH至等電點(diǎn)和加入脫水劑)蛋白質(zhì)便容易凝集析出?！ ∪鐚⒌鞍踪|(zhì)溶液pH調(diào)節(jié)到等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)分子呈等電狀態(tài)，雖然分子間同性電荷相互排斥作用消失了。但是還有水化膜起保護(hù)作用，一般不致于發(fā)生凝聚作用，如果這時(shí)再加入某種脫水劑，除去蛋白質(zhì)分子的水化膜，則蛋白質(zhì)分子就會(huì)互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白質(zhì)脫水，然后再調(diào)節(jié)pH到等電點(diǎn)，也同樣可使蛋白質(zhì)沉淀析出?！ ∫鸬鞍踪|(zhì)沉淀的主要方法有下述幾種： (一)鹽析(Salting Out) 在蛋白質(zhì)溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性而使其析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質(zhì)鹽析時(shí)所需的鹽濃度及pH不同，故可用于對(duì)混和蛋白質(zhì)組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出來，鹽析沉淀的蛋白質(zhì)，經(jīng)透析除鹽，仍保證蛋白質(zhì)的活性。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH至等電點(diǎn)后，再用鹽析法則蛋白質(zhì)沉淀的效果更好?！ ? (二)重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)可以與重金屬離子如汞、鉛、銅、銀等結(jié)合成鹽沉淀，沉淀的條件以pH稍大于等電點(diǎn)為宜。因?yàn)榇藭r(shí)蛋白質(zhì)分子有較多的負(fù)離子易與重金屬離子結(jié)合成鹽。重金屬沉淀的蛋白質(zhì)常是變性的，但若在低溫條件下，并控制重金屬離子濃度，也可用于分離制備不變性的蛋白質(zhì)?！ ∨R床上利用蛋白質(zhì)能與重金屬鹽結(jié)合的這種性質(zhì)，搶救誤服重金屬鹽中毒的病人，給病人口服大量蛋白質(zhì)，然后用催吐劑將結(jié)合的重金屬鹽嘔吐出來解毒?！ ?三)生物堿試劑
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