本規(guī)范規(guī)定了化妝品微生物學檢驗總則(編輯修改稿)
2024-08-31 17:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 搖勻。傾注平皿備用。 蛋白胨水(作靛基質(zhì)試驗用) 成分： 蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g 氯化鈉 5g 蒸餾水 1000mL 制法：將上述成分加熱融化，～，分裝小試管，(15 lb)15min高壓滅菌。 靛基質(zhì)試劑 柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25mL。 試驗方法：接種細菌于蛋白胨水中，于44177?！媾囵B(yǎng)24h。 ～，輕搖試管。陽性者于試劑層顯深玫瑰紅色。 注：蛋白胨應含有豐富的色氨酸，每批蛋白胨買來后，應先用已知菌種鑒定后方可使用。 革蘭氏染色液： 染液制備 結(jié)晶紫染色液： 結(jié)晶紫 1g 95%乙醇 20mL 1%草酸銨水溶液 80mL將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。 革蘭氏碘液： 碘 1g 碘化鉀 2g 蒸餾水加至 300mL 將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300mL。 脫色液：95%乙醇。 復染液： a. 沙黃復染液： 沙黃 95%乙醇 10mL 蒸餾水 90mL 將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。 b. 稀石碳酸復紅液：稱取堿性復紅10g，研細，加95%乙醇100mL，放置過夜，濾紙過濾。取該液10mL，加5%石碳酸水溶液90mL混合，即為石碳酸復紅液。再取此液10mL加水90mL，即為稀石碳酸復紅液。 染色法 將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗。 滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。 滴加95%乙醇脫色，約30s，或?qū)⒁掖嫉螡M整個涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個涂片，脫色10s，水洗。 滴加復染液，復染1min，水洗，待干，鏡檢。 染色結(jié)果 革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。 注：如用1:10稀釋石碳酸復紅染色液作復染，復染時間僅需10s。5 操作步驟 取10mL 1:10稀釋的檢液，加到10mL雙倍濃度的乳糖膽鹽培養(yǎng)基中，置44℃177?！媾囵B(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為糞大腸菌群陰性。 如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，劃線接種到伊紅美藍瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)18 h～24 h。同時取該培養(yǎng)液1～2滴接種到蛋白胨水中，置44℃177。℃培養(yǎng)24h。 經(jīng)培養(yǎng)后，在上述平板上觀察有無典型菌落生長。糞大腸菌群在伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基上的典型菌落呈深紫黑色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤。也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紫色，中心較深的菌落，亦常為糞大腸菌群，應注意挑選。 挑取上述可疑菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢。 在蛋白胨水培養(yǎng)液中，觀察靛基質(zhì)反應。陽性者液面呈玫瑰紅色；陰性反應液面呈試劑本色。6 檢驗結(jié)果報告根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗陽性，則可報告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。 四、綠膿桿菌Pseudomonas Aeruginosa1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中綠膿桿菌的檢驗方法?！ ”疽?guī)范適用于化妝品中綠膿桿菌的檢驗。2 定義 本規(guī)范采用下列定義。 綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃條件下能生長?！ ≡摼鷮θ擞兄虏×?，可使傷處化膿，引起敗血癥等。3 儀器 恒溫培養(yǎng)箱：37℃、42℃。 三角瓶。 試管。 平皿。 刻度吸管：10mL、2mL、1mL。 顯微鏡。 載玻片。 接種針、接種環(huán)。 電爐。 高壓滅茵器。4 培養(yǎng)基和試劑 SCDLP液體培養(yǎng)基 。 十六烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基 成分： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 十六烷基三甲基溴化銨 瓊脂 20g 蒸餾水 1000mL 制法：除瓊脂外，將上述成分混合加熱溶解，～，加入瓊脂， (10 lb)20min滅菌后，制成平板備用。 乙酰胺培養(yǎng)基 成分： 乙酰胺 10g 氯化鈉 5g 無水磷酸氫二鉀 無水磷酸二氫鉀 硫酸鎂(MgSO47H2O) 酚紅 （%溶液1mL） 瓊脂 20g 蒸餾水 1000mL 制法：除瓊脂和酚紅外，將其它成分加到蒸餾水中，加熱溶解，加入瓊脂、酚紅，(15 lb)20min高壓滅菌后，制成平板備用。 綠膿菌素測定用培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 20g 氯化鎂 硫酸鉀 10g 瓊脂 18g 甘油(化學純) 10g 蒸餾水 1000mL 制法：將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中，加溫使其溶解，加入瓊脂和甘油，加熱溶解，分裝于試管內(nèi)，(10 lb)20min高壓滅菌后，制成斜面?zhèn)溆谩? 明膠培養(yǎng)基 成分： 牛肉膏 3g
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