本規(guī)范規(guī)定了化妝品微生物學(xué)檢驗總則-文庫吧
2025-07-20 17:04 本頁面
【正文】 5 操作步驟 用滅菌吸管吸取1:10稀釋的檢液2mL，分別注入到兩個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。另取1mL注入到9mL滅菌生理鹽水試管中(注意勿使吸管接觸液面)，更換一支吸管，并充分混勻，制成1:100檢液。吸取2mL，分別注入到兩個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。如樣品含菌量高，還可再稀釋成1:1000，1:10000，……等，每種稀釋度應(yīng)換1支吸管。 將融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注到平皿內(nèi)，每皿約15mL，隨即轉(zhuǎn)動平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h。另取一個不加樣品的滅菌空平皿，加入約15mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，為空白對照。 為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，%的TTC溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。6 菌落計數(shù)方法先用肉眼觀察，點數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5～10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該平皿不宜計數(shù)。若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘以2，以代表全皿菌落數(shù)。7 菌落計數(shù)及報告方法 首先選取平均菌落數(shù)在30～300個之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的范圍。當只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)(見表1中例1)。 若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30～300個之間，則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來決定，若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)，若大于2則報告其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)(見表1中例2及例3)。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300個，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例4)。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30個，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1例5)。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300個之間，其中一個稀釋度大于300個，而相鄰的另一稀釋度小于30個時，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例6)。 若所有的稀釋度均無菌生長，報告數(shù)為每g或每mL小于10CFU。 菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告之，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計算。為了縮短數(shù)字后面零的個數(shù)，可用10的指數(shù)來表示(見表1報告方式欄)。在報告菌落數(shù)為“不可計”時，應(yīng)注明樣品的稀釋度。表1 菌落計數(shù)結(jié)果及報告方式例 次不同稀釋度平均菌落數(shù)101 102 103兩稀釋度菌數(shù)之比菌落總數(shù) CFU/mL或 CFU/g 報告方式 CFU/mL或 CFU/g11365 164 20 ─ 1640016000 或 10422760 295 46 3800010432890 271 60 2710027000 或 1044不可計 4650 513 ─513000510000 或 1055 27 11 5 ─ 270270或 1026不可計 305 12 ─ 3050031000 或 1047 0 0 0 ─＜１10＜10 ＊CFU：菌落形成單位。 三、糞大腸菌群Fecal Coliforms1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中糞大腸菌群的檢驗方法。 本規(guī)范適用于化妝品中糞大腸菌群的檢驗。2 定義 本規(guī)范采用下列定義 糞大腸菌群(Fecal coliforms)系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，℃培養(yǎng)24h～48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣?！ ≡摼鷣碜匀撕蜏匮獎游锛S便，是重要的衛(wèi)生指示菌。3 儀器 恒溫水浴箱或隔水式恒溫箱：44℃177?！?。 溫度計。 顯微鏡。 載玻片。 接種環(huán)。 電爐。 三角瓶。 試管。 小倒管。 pH計或pH試紙。 高壓滅茵器。 刻度吸管：10mL、2mL、1mL。 平皿。4 培養(yǎng)基和試劑 雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 40g 豬膽鹽 10g 乳糖 10g %溴甲酚紫水溶液 5mL 蒸餾水 1000mL 制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中，%溴甲酚紫水溶液5mL，混勻，分裝試管(每支試管中加一個小倒管)。 (10 lb)20min滅菌。 伊紅美蘭(EMB)瓊脂 成分： 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氫二鉀 2g 瓊脂 20g 2%伊紅水溶液 20mL %美藍水溶液 13mL 蒸餾水 1000mL 制法：先將瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀、蛋白胨，混勻，使之溶解。再以蒸餾水補足至1000mL?！?，分裝于三角瓶內(nèi)，(15 lb)15min高壓滅菌備用。臨用時加入乳糖并加熱融化瓊脂。冷至60℃左右無菌操作加入滅菌的伊紅美藍溶液，
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