第十一章基因工程(編輯修改稿)
2024-08-28 13:27 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 NA雜交后，結(jié)合 Sl核酸酶水解，可確定內(nèi)含子在基因組 DNA中的定位 ⑤ 修整漸進(jìn)性刪除突變的末端 核酸酶 Bal 31核酸酶 ① 用于不同長(zhǎng)度的刪除突變克隆實(shí)驗(yàn)及基因結(jié)構(gòu)、機(jī)能分析 ② 繪制 DNA限性?xún)?nèi)切圖譜 ③ 研究超螺旋 DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)和致畸劑引起的雙鏈 DNA螺旋結(jié)構(gòu)變化 基因工程載體 載體 （ vector） 是把外源基因引入受體細(xì)胞并在其中能自我復(fù)制的小 DNA 分子。 基因工程中的載體應(yīng)具有如下一些特性 ： 獨(dú)立和穩(wěn)定的 DNA自我復(fù)制 易于從宿主細(xì)胞中分離，并進(jìn)行純化 具有適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶位點(diǎn) 有報(bào)告基因 細(xì)菌質(zhì)粒載體 質(zhì)粒 是細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈的DNA分子。 質(zhì)粒 DNA的分子特性 質(zhì)粒 DNA分子呈雙鏈共價(jià)封閉環(huán)狀、自然旋轉(zhuǎn)成超螺旋構(gòu)型（ closed circle DNA， ccDNA）， 有時(shí)會(huì)因單鏈斷裂而成為開(kāi)鏈環(huán)狀DNA（ open circle DNA， ocDNA） 有時(shí)雙鏈斷開(kāi)成線(xiàn)性 DNA（ liner DNA， lDNA） 噬菌體載體 細(xì)菌質(zhì)粒載體所能攜帶的外源基因只限于10kb以下的 DNA片段，噬菌體作為載體，可插入長(zhǎng) 10kb～ 20kb甚至更大的一些外源 DNA片段。 λ 噬菌體 λ噬菌體是一種溫和噬菌體，即在感染其宿主菌大腸桿菌后，呈現(xiàn)溶菌性和溶源性?xún)深?lèi)生長(zhǎng)方式。 粘性質(zhì)粒載體 粘性質(zhì)粒載體 （也稱(chēng)柯斯質(zhì)粒載體或粘粒，cosmid vector） 本質(zhì)上是含有抗性基因、單一克隆位點(diǎn)以及 λDNAcos位點(diǎn)（體外包裝所必需）的細(xì)菌質(zhì)粒。 粘性質(zhì)粒優(yōu)點(diǎn)是克隆容量較大，可容納35kb－ 45kb外源 DNA， 轉(zhuǎn)化率也較高。常用的粘性粒有 PHC79。 PJB MUA－ 3和 KOSI等，它們大多具有一種或多種限制性?xún)?nèi)。切酶的單一酶切位點(diǎn)。極其適合高等真核基因的克隆工作。 YAC載體 酵母人工染色體（ yeast artificial chromosome,）是人工構(gòu)建的染色體： 目前能插入片段最大的載體。 病毒載
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