【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 a）標(biāo)準(zhǔn)指示菌株：嗜熱脂肪桿菌芽孢，菌片含菌及抗力符合國(guó)家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；b）標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包的制作：由16條41cm66cm的全棉手術(shù)巾制成。制作方法：將每條手術(shù)巾的長(zhǎng)邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊放，制成23cm23cm15cm的測(cè)試包；c）標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試包或生物PCD的制作方法：將至少一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)指示菌片裝入滅菌小紙袋內(nèi)或至少一個(gè)自含式生物指示劑，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的中心部位即完成標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試包或生物PCD的制作；d）培養(yǎng)方法：經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的指示滅片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃177。1℃培養(yǎng)7d（自含式生物批示物按產(chǎn)品說(shuō)明），觀察培養(yǎng)結(jié)果；e）結(jié)果判定 陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，陰性對(duì)照駔培養(yǎng)陰性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陰性，判定為滅菌合格。陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，陰性對(duì)照組培養(yǎng)陰性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陽(yáng)性，則滅菌不合格，同時(shí)應(yīng)進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)組陽(yáng)性的細(xì)菌是否為指示菌或是污染所致。自含式生物批示物不需要做陰性對(duì)照；f）小型壓力蒸汽滅菌器因一般無(wú)標(biāo)準(zhǔn)生物監(jiān)測(cè)包，應(yīng)選擇滅菌器常用的、有代表性的滅菌包制作生物測(cè)試包或生物PCD，置于滅菌器最難滅菌的部位，且滅菌器應(yīng)處于滿載狀態(tài)。生物測(cè)試包或生物PCD應(yīng)側(cè)放，體積大時(shí)可平放；g）采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時(shí)，應(yīng)直接將一支生物批示物，置于空載的滅菌器內(nèi)，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后取出，規(guī)定條件下培養(yǎng)，觀察結(jié)果；h）可使用一次性標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試包，對(duì)滅菌器的滅菌質(zhì)量進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)；i）注意事項(xiàng)1）監(jiān)測(cè)所用菌片或自含式菌管應(yīng)取得衛(wèi)生部消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可證批件，并在有效期內(nèi)使用；2）如果1d內(nèi)進(jìn)行多次生物監(jiān)測(cè)，且生物指示劑為同一批號(hào)，則只設(shè)一次陽(yáng)性對(duì)照即可。 BD測(cè)試方法如下：a）BD測(cè)試包的制作方法 BD測(cè)試包由100%脫脂棉布或100%全棉手術(shù)巾折疊成長(zhǎng)30177。2cm、寬25177。2cm、高25cm～28cm大小的布包；將專用BD測(cè)試紙，放入上述布包的中間；制成的BD測(cè)試包的重量要求為4kg177。，或采用一次性使用或反復(fù)使用的BD測(cè)試包。b）BD測(cè)試方法 測(cè)試前先預(yù)熱滅菌器，將BD測(cè)試包水平放于滅菌柜內(nèi)滅菌車的前底層，靠近柜門與排氣口底前方；柜內(nèi)除測(cè)試包外無(wú)任何物品；在134℃溫度下，取出測(cè)試包，觀察BD測(cè)試紙顏色變化。c）結(jié)果判定 BD測(cè)試紙均勻一致變色，說(shuō)明BD試驗(yàn)通過(guò)，滅菌器可以使用；變色不均說(shuō)明BD試驗(yàn)失敗，可再重復(fù)一次BD測(cè)試，合格，滅菌器可以使用；不合格，需檢查BD測(cè)試失敗原因，直至BD測(cè)試通過(guò)后該滅菌器方能使用。 干熱滅菌的效果監(jiān)測(cè) 干熱滅菌效果的物理監(jiān)測(cè)法、化學(xué)監(jiān)測(cè)法和生物測(cè)監(jiān)測(cè)法。 標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試管的制作方法如下：a）標(biāo)準(zhǔn)指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢，菌片含菌及抗力符合國(guó)家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；b）標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試管的制作方法：將標(biāo)準(zhǔn)指示菌片分別裝入滅菌中試管內(nèi)（1片/管）；c）監(jiān)測(cè)方法：將標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試管，置于滅菌器最難滅菌的部位，即滅菌器與每層門把手對(duì)角線內(nèi)、外角處放置2個(gè)含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80℃時(shí)，加蓋試管帽后取出試管，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照對(duì)和陰性對(duì)照；d）培養(yǎng)方法：在無(wú)菌條件下，加入普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5mL/管），36℃177。1℃培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第7d；e）結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，陰性對(duì)照組培養(yǎng)陰性，若每個(gè)指示菌片接種的肉湯均澄清，判為滅菌合格，若陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，陰性對(duì)照組培養(yǎng)陰性，而指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合格，對(duì)難以判定的肉湯管，,用滅菌L棒或接種環(huán)涂勻,置于36℃177。1℃培養(yǎng)48h,觀察菌落形態(tài),并做涂片染色鏡檢,判斷是否指示菌生長(zhǎng),若有指示菌生長(zhǎng)，判為滅菌不合格；若無(wú)指示菌生長(zhǎng),判為滅菌合格；f)注意事項(xiàng):監(jiān)測(cè)所用菌片應(yīng)取得衛(wèi)生部消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可批件,并在有效期內(nèi)使用。、化學(xué)監(jiān)測(cè)法和生物監(jiān)測(cè)法。：a）標(biāo)準(zhǔn)指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢，菌片含菌及抗力符合國(guó)家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；b）常規(guī)生物測(cè)試包的制作方法：取一個(gè)20ml的無(wú)菌注射器，去掉針頭，拔出針?biāo)?，將?biāo)準(zhǔn)生物指示菌放入針筒內(nèi)，帶孔的塑料帽應(yīng)朝向針頭處，再將注射器的針?biāo)ú寤蒯樛玻ㄗ⒁獠灰黾吧镏甘疚铮?，之后用一條全棉小毛巾兩層包裹，置于塑料包裝袋中，封裝；c）監(jiān)測(cè)方法：將常規(guī)生物測(cè)試包放在滅菌器最難滅菌的部位（整個(gè)裝載滅菌包的中心部位）。%的葡萄糖肉湯培養(yǎng)基管中，36℃177。1℃培養(yǎng)7d（自含式生物指示物應(yīng)遵循產(chǎn)品說(shuō)明），觀察培養(yǎng)基顏色變化，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照；d）結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陰性。判定為滅菌合格。陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陽(yáng)性，則滅菌不合格；同時(shí)應(yīng)進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)組培養(yǎng)陽(yáng)性的細(xì)菌是否為指示菌或污染菌所致；e）注意事項(xiàng)：監(jiān)測(cè)所用菌片應(yīng)取得衛(wèi)生部消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。 紫外線消毒的效果監(jiān)測(cè) 紫外線燈輻照度值的測(cè)定 紫外線燈輻照計(jì)測(cè)定法開啟紫外線燈5min后，特殊紫外線燈在推薦使用的距離下測(cè)定，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)值即為該紫外線燈的幅照度值。 紫外線強(qiáng)度照射指示卡監(jiān)測(cè)法開啟紫外線燈5min后，蔣指示卡置于置于紫外線燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射1min，紫外線照射后，觀察指示卡色塊的顏色，將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，讀出照射強(qiáng)度。 結(jié)果判定普通30w直管型紫外線燈，新燈管的輻照強(qiáng)度應(yīng)符合GB19258要求；使用中紫外線燈照射強(qiáng)度≥70μW/cm2為合格；30W高強(qiáng)度紫外線燈的輻射強(qiáng)度≥180μW/cm2為合格。 注意事項(xiàng)測(cè)定時(shí)電壓220V177。5V，溫度20℃~25℃，相對(duì)濕度＜60%，紫外線輻照計(jì)應(yīng)在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用；指示卡應(yīng)在獲得衛(wèi)生部消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用?？諝庀镜挠行ПO(jiān)測(cè) 。 注意事項(xiàng) 紫外線燈在投放市場(chǎng)之前應(yīng)按照衛(wèi)生部有關(guān)規(guī)定進(jìn)行產(chǎn)品衛(wèi)生安全評(píng)價(jià)。 紫外線消毒效果監(jiān)測(cè)時(shí)，采樣液（平板中）不加中和劑。 手和皮膚消毒效果監(jiān)測(cè)應(yīng)遵循WS/T313的要求 皮膚的消毒效果監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間按照產(chǎn)品使用說(shuō)明規(guī)定的作用時(shí)間，達(dá)到消毒效果后及時(shí)采樣。 采樣方法用5cmx5cm的滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ML含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，及時(shí)送檢，不規(guī)則的皮膚可用棉拭子直接涂擦采樣。 檢測(cè)方法將采樣管在混勻器上震動(dòng)20s或用力振打80次，每一本接種2個(gè)平皿，平皿內(nèi)加入已溶化的45℃~48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml~18 ml ,邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃177。1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。細(xì)菌菌落數(shù)計(jì)算方法見式（）：細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm2）= 平板上菌落數(shù)X稀釋倍數(shù) 采樣面積（cm2) ……（） 結(jié)果判定皮膚消毒效果的判定標(biāo)準(zhǔn)遵循WS/T313中外科手消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。 注意事項(xiàng)采樣皮膚表面不足5cmx5cm，可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。 物體表面的消毒效果監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間在消毒處理后或懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時(shí)進(jìn)行采樣。 采樣方法用5cmx5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，（PBS）或生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)采樣4個(gè)規(guī)格板面積，被采表面＜100cm2，取全部表面，被采表面≥100cm2，取100cm2。剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10ml無(wú)菌檢驗(yàn)用洗脫液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用，棉拭子直接涂抹物體表面采樣。采樣物體表面有消毒劑殘留時(shí)，采樣液應(yīng)含相應(yīng)中和劑。 檢測(cè)方法充分震蕩采樣管后，將冷至40℃～45℃的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15ml～20ml，36℃177。1℃恒溫箱培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)，懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時(shí)，進(jìn)行目標(biāo)微生物的檢測(cè)。 結(jié)果計(jì)算 規(guī)則物體表面物體表面菌落總數(shù)計(jì)算方法見式（）。物體表面菌落總數(shù)（cfu/ cm2）=平均每皿菌落數(shù)X洗脫液稀釋倍數(shù) 采樣面積（cm2) ……（） 小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件表示。 結(jié)果判定 潔凈手術(shù)部、其他潔凈場(chǎng)所，非潔凈手術(shù)部（室）、非潔凈骨髓移植病房、產(chǎn)房、導(dǎo)管室、新生兒室、***病房、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房、血液病病區(qū)等；物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)≤5cfu/ cm2。 兒科病房、母嬰同室、婦產(chǎn)科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室、輸血科、消毒供應(yīng)室、血液透析中心（室）、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病室、感染疾病科門診及其病房等，；物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)≤10 cfu/ cm2 空氣消毒效果監(jiān)測(cè) 采樣時(shí)間采用潔凈技術(shù)凈化空氣的房間在潔凈系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣；未采用潔凈技術(shù)凈化空氣的房間在消毒或規(guī)定的通風(fēng)換氣后與從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣；或懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時(shí)采樣。 監(jiān)測(cè)方法（室）及其他潔凈用房可選擇沉降法或浮游菌法，參照GB50333要求進(jìn)行監(jiān)測(cè)。浮游菌法可選擇六級(jí)撞擊式空氣采樣器或其他經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器?！?，按采樣器使用說(shuō)明書操作，每次采樣時(shí)間不應(yīng)超過(guò)30min。房間面積＞10 m2者，每增加10 m2增設(shè)一個(gè)采樣點(diǎn)。 未采用潔凈技術(shù)凈化空氣的房間采用沉降法：室內(nèi)面積≤30 m2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線三點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)應(yīng)距墻壁1m處；室內(nèi)面積＞30 m2，設(shè)四角及中央五點(diǎn)，四角的布點(diǎn)位置應(yīng)距墻壁1m處。將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿（Φ90mm）放置各采樣點(diǎn)，～；采樣時(shí)將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露規(guī)定時(shí)間后蓋上平皿蓋及時(shí)送檢。 將送檢平皿置36℃177。1℃恒溫箱培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)，若懷疑與醫(yī)院感染暴發(fā)有關(guān)時(shí)，進(jìn)行目標(biāo)微生物的檢測(cè)。 結(jié)果計(jì)算 沉降法按平均每皿的菌落數(shù)報(bào)告：cfu/（皿．暴露時(shí)間） 浮游菌發(fā)計(jì)算公式見式（）空氣中菌落總數(shù)（cfu/m3）= 采樣器各平皿菌落數(shù)之和（cfu) 采樣速度（L/min）X采樣時(shí)間（min） 1000 ……（）A．６．４　結(jié)果判定A．６．４．１潔凈手術(shù)部（室）和其他潔凈場(chǎng)所，空氣中的細(xì)菌菌落總數(shù)要求應(yīng)遵循ＧＢ５０３3３．A．６．４．２非潔凈手術(shù)部（室）、非潔凈骨髓移植病房、產(chǎn)房、導(dǎo)管室、新生兒室、***病房、燒傷病房重癥監(jiān)護(hù)病房、血液病病區(qū)空氣中的細(xì)菌菌落總數(shù)≤４cfu／（１５ｍｉｎ直徑９ｃｍ平皿）。A．６．４．３兒科病房、母嬰同室、婦產(chǎn)科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室、輸血科、消毒供應(yīng)中心、血液透析中心（室）、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病室、感染疾病科門診及其病房空氣中的細(xì)菌菌落總數(shù)≤4cfu/(5min直徑9cm平皿)。A．６．5 注意事項(xiàng) 采樣前，關(guān)閉門、窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10min后采樣。A．7 消毒液的監(jiān)測(cè)A．7．1 常用消毒液有效成分含量測(cè)定 庫(kù)存消毒劑的有效成分含量依照產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)；使用中消毒液的有效濃度測(cè)定可用上述方法，也可使用經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒劑濃度紙（卡）進(jìn)行監(jiān)測(cè)。A．7．2 使用中消毒液染菌量測(cè)定A．7．2．1 .1 ，加入9mL中和劑中混勻。醇類與酚類消毒劑用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑、%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰、%%卵磷脂中和劑，%甘氨酸中和劑，含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑可在中和劑中加入吐溫80至3%；也可使用該消毒劑消毒效果檢測(cè)的中和劑鑒定試驗(yàn)確定的中和劑。A．7． ，將冷至40℃～45℃的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL～20 mL,36℃177。1℃恒溫箱培養(yǎng)72h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)；懷疑與醫(yī)院感染爆發(fā)有關(guān)時(shí)，進(jìn)行目標(biāo)微生物的檢測(cè)。消毒液染菌量計(jì)算見式（）： 消毒液染菌量（CFU/mL）=平均每皿菌落數(shù)10稀釋倍數(shù)………（）A．7．2．2 結(jié)果判斷使用中滅菌用消毒液；無(wú)菌生長(zhǎng)；使用中皮膚黏膜消毒液染菌量：≤10CFU/mL，其他使用中消毒液染菌量≤100CFU/mL。A．7．3 注意事項(xiàng)采樣后4h內(nèi)檢測(cè)。A8 清潔用品的消毒效果監(jiān)測(cè)A．8．1 采樣時(shí)間 消毒后、使用前進(jìn)行采樣。A．8．2 采樣方法 布巾、地巾等物品可用無(wú)菌的方法剪取1cm3cm，直接投入5ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水中，及時(shí)送檢。A．8．3 檢測(cè)方法 將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，取采樣液檢測(cè)致病菌。A．8．4 結(jié)果判定 未檢出致病菌為消毒合格。A．9 致病菌的檢測(cè) 當(dāng)懷疑被某致病菌污染時(shí)，或懷疑醫(yī)院感染與某致病菌有關(guān)時(shí)，致病菌的檢測(cè)依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)菌的檢測(cè)。檢測(cè)方法參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。附 錄 B（資料性附錄）消毒試驗(yàn)用試劑和培養(yǎng)基配方B．1 磷酸鹽緩沖液（PBS。，） 無(wú)水磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 蒸餾水加至 1000mL將各成分加入到1000mL蒸餾水中，待完全溶解后，～，于121℃壓力蒸氣滅菌20min備用。B．2 無(wú)菌檢驗(yàn)用洗脫液 吐溫―80