人用重組dna制品質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則(編輯修改稿)
2025-08-09 21:27 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的去除。 如采用親和層析技術(shù)，例如用單克隆抗體，應(yīng)有檢測(cè)可能污染此類(lèi)外源性物質(zhì)的方法，不應(yīng)含有可測(cè)出的異種免疫球蛋白。 對(duì)整個(gè)純化工藝應(yīng)進(jìn)行全面研究，包括能夠去除宿主細(xì)胞蛋白、核酸、糖、病毒或其它雜質(zhì)以及在純化過(guò)程中加入的有害的化學(xué)物質(zhì)等。 關(guān)于純度的要求可視制品的用途和用法而確定，例如，僅使用一次或需反復(fù)多次使用；用于健康人群或用于重癥患者；對(duì)純度可有不同程度要求。 （三）最終產(chǎn)品的控制 應(yīng)建立有關(guān)產(chǎn)品的鑒別、純度、穩(wěn)定性和活性等方面的試驗(yàn)方法。檢測(cè)的必要性和純度要求取決于多種因素：產(chǎn)品性質(zhì)和用途、生產(chǎn)和純化工藝及生產(chǎn)工藝的經(jīng)驗(yàn)。一般說(shuō)來(lái)下列試驗(yàn)對(duì)控制產(chǎn)品質(zhì)量是可以采用的。新的分析技術(shù)及對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的改進(jìn)正在不斷進(jìn)行，適當(dāng)時(shí)應(yīng)使用這些新的技術(shù)。 1．物理化學(xué)鑒定 （1）氨基酸組成 使用各種水解法和分析手段測(cè)定氨基酸的組成，并與目的蛋白基因序列推導(dǎo)的氨基酸組成或天然異構(gòu)體比較。如需要時(shí)應(yīng)考慮分子量的大小。多數(shù)情況下，氨基酸組成分析對(duì)肽段和小蛋白可提供有價(jià)值的結(jié)構(gòu)資料，但對(duì)大蛋白一般意義較小。在多數(shù)情況下，氨基酸定量分析數(shù)據(jù)可用于確定蛋白含量。 （2）氨基酸末端序列 氨基酸末端分析用于鑒別N端和C端氨基酸的性質(zhì)和同質(zhì)性。若發(fā)現(xiàn)目的產(chǎn)品的末端氨基酸發(fā)生改變時(shí)，應(yīng)使用適當(dāng)?shù)姆治鍪侄闻卸ㄗ儺愺w的相應(yīng)變異數(shù)量。應(yīng)將這些氨基酸末端序列與來(lái)自目的產(chǎn)品基因序列推導(dǎo)的氨基酸末端序列進(jìn)行比較。 （3）肽譜 應(yīng)用合適的酶或化學(xué)試劑使所選的產(chǎn)品片段產(chǎn)生不連續(xù)多肽，應(yīng)用HPLC或其他適當(dāng)?shù)姆椒ǚ治鲈摱嚯钠巍?yīng)盡量應(yīng)用氨基酸組成分析技術(shù)，N末端測(cè)序或質(zhì)譜法鑒別多肽片段。對(duì)批簽發(fā)來(lái)說(shuō),經(jīng)驗(yàn)證的肽譜分析經(jīng)常是確證目的產(chǎn)品結(jié)構(gòu)/鑒別的適當(dāng)方法。 （4）巰基和二硫鍵 如果依據(jù)目的產(chǎn)品基因序列存在半胱氨酸殘基時(shí)，應(yīng)盡可能確定巰基和/或二硫鍵的數(shù)量和位置。使用方法包括肽譜分析（還原和非還原條件下）、質(zhì)譜測(cè)定法或其他適當(dāng)?shù)姆椒ā?（5）碳水化合物結(jié)構(gòu) 應(yīng)測(cè)定糖蛋白中碳水化合物含量（中性糖、氨基糖、唾液酸）。此外盡可能分析碳水化合物的結(jié)構(gòu)、寡糖形態(tài)（長(zhǎng)鏈狀）和多肽的糖基化位點(diǎn)。 （6）分子量 應(yīng)用分子篩層析法、SDSPAGE（還原和/或非還原條件下）、質(zhì)譜測(cè)定法、和/或其他適當(dāng)技術(shù)測(cè)定分子量。 （7）等電點(diǎn) 通過(guò)等電聚焦電泳或其他適當(dāng)?shù)姆椒y(cè)定。 （8）消光系數(shù)（或克分子吸光度）16
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