【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的抗蟲(chóng)基因；（3）同時(shí)使用兩個(gè)或兩個(gè)以上的抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)化同一種植物，或多次轉(zhuǎn)化，獲得抗蟲(chóng)基因集中的植物；（4）應(yīng)用更新、更專一地能高效調(diào)控基因表達(dá)的啟動(dòng)子以調(diào)節(jié)基因的表達(dá)；（5）在作物栽培上采取“高劑量/避難所”策略，即轉(zhuǎn)基因植物與非轉(zhuǎn)基因植物間隔種植，與生態(tài)防治相結(jié)合。 水稻基因工程育種的技術(shù)體系基因工程育種研究最早始于20世紀(jì)70年代，是利用分子生物學(xué)和基因工程手段，有目的地將外源基因?qū)氩⒄系街参锘蚪M中，通過(guò)外源基因在受體植物內(nèi)的表達(dá)和遺傳，或通過(guò)對(duì)內(nèi)源基因表達(dá)的調(diào)控，從而改良受體植物性狀的一種技術(shù)。 構(gòu)建嵌合基因 基因的表達(dá)調(diào)控主要是依靠其本身的調(diào)控序列，如啟動(dòng)子和終止子，而不是其編碼序列。外源基因整合到受體植物中能夠高效表達(dá)的最重要的條件之一就是要有一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子序列。煙草花葉病毒（CaMv35S）是最早應(yīng)用于基因工程中的組成型啟動(dòng)子，但該啟動(dòng)子在單子葉植物中的活性相對(duì)較低，現(xiàn)在在轉(zhuǎn)化時(shí)多采用一些新發(fā)現(xiàn)的強(qiáng)啟動(dòng)子，如玉米泛生素基因啟動(dòng)子(pUb1)、水稻肌動(dòng)基因Actl啟動(dòng)子(pActin 1)及玉米嵌合啟動(dòng)子（pEmu）等，其中使用最為廣泛的是玉米泛生素啟動(dòng)子。而終止子大多采用胭脂堿合成酶基因(nos)的終止子(nost)[27]。在構(gòu)建嵌合基因時(shí)，除啟動(dòng)子、目標(biāo)基因和終止子外，還要加入一個(gè)選擇標(biāo)記基因或報(bào)告基因，以便轉(zhuǎn)基因受體的篩選與檢測(cè)。目前常用的選擇標(biāo)記基因主要有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移基因(hpt)、新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(nptⅡ)等抗生素類選擇標(biāo)記基因和抗除草劑基因（bar）等。常用的報(bào)告基因有綠色熒光蛋白基因(gfp)和α葡糖苷酸酶基因(gus)等[28]。 選擇轉(zhuǎn)化載體在運(yùn)用基因槍法，電激法等對(duì)DNA直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，不需要構(gòu)建特殊的載體，可直接將含目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞。而根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，則需構(gòu)建含TDNA的載體，將目的基因插入TDNA，以適應(yīng)農(nóng)桿菌通過(guò)TDNA將目的基因?qū)氩⒄系绞荏w基因組中，現(xiàn)在研究最常用的是Ti質(zhì)粒[29]。在根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化中，所用載體大多數(shù)為雙TDNA載體，其中一個(gè)TDNA含有目的基因，另一個(gè)TDNA含有標(biāo)記基因或報(bào)告基因，以便于轉(zhuǎn)目的基因受體的篩選與檢測(cè)及轉(zhuǎn)基因后代選擇標(biāo)記基因的去除。 選擇轉(zhuǎn)化受體良好的轉(zhuǎn)化受體是基因轉(zhuǎn)化成功的前提條件，因此在選擇的轉(zhuǎn)化受體應(yīng)具有穩(wěn)定的外植體來(lái)源，高效穩(wěn)定的再生能力，對(duì)選擇性抗生素敏感等特征。目前，用于水稻遺傳轉(zhuǎn)化的受體主要有下列幾種：（1）愈傷組織 愈傷組織是目前水稻遺傳轉(zhuǎn)化應(yīng)用最為廣泛的轉(zhuǎn)化受體，用于水稻遺傳轉(zhuǎn)化的愈傷組織大多是由水稻成熟胚、幼胚、幼穗誘導(dǎo)得到的胚性愈傷組織。水稻的成熟胚因取材不受季節(jié)環(huán)境限制，且愈傷組織轉(zhuǎn)化效率高，而被廣泛應(yīng)用于水稻的遺傳轉(zhuǎn)化。水稻的幼胚與幼穗獲得的愈傷組織雖然轉(zhuǎn)化效率很高，但取材受季節(jié)和環(huán)境的限制，現(xiàn)階段應(yīng)用較少。 （2）原生質(zhì)體 20世紀(jì)80年代末至90年代初，Toriyama等用PEG法成功轉(zhuǎn)化了水稻的原生質(zhì)體，得到的水稻轉(zhuǎn)基因植株可育 [30]后，人們開(kāi)始將水稻原生質(zhì)體作為PEG法轉(zhuǎn)化水稻的受體。對(duì)水稻原生質(zhì)體可以直接高效地進(jìn)行轉(zhuǎn)化，而且轉(zhuǎn)化率較高，但原生質(zhì)體因培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，培養(yǎng)條件要求高，分離制備非常困難等原因，現(xiàn)已很少應(yīng)用。（3）幼嫩的子房、卵細(xì)胞 通過(guò)直接對(duì)幼嫩的子房、未成熟的卵細(xì)胞及種胚注射外源DNA的方法導(dǎo)入外源基因[31]，此方法易于得到轉(zhuǎn)基因種子，避免了轉(zhuǎn)化體夭亡及不育現(xiàn)象，避開(kāi)了繁瑣的細(xì)胞及組織培養(yǎng)過(guò)程，但是轉(zhuǎn)化后代群體較大，轉(zhuǎn)基因植株的篩選與檢測(cè)工作量較大。 轉(zhuǎn)化方法（1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)法 此方法自Zembryski等利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草獲得首例轉(zhuǎn)基因植株后[32]，逐漸得到推廣。由于大多數(shù)單子葉植物不是農(nóng)桿菌的天然寄主，限制了此法在單子葉植物中的應(yīng)用。20世紀(jì)90年代以后，人們對(duì)農(nóng)桿菌的侵染機(jī)理做了深入的研究，對(duì)整個(gè)轉(zhuǎn)化過(guò)程了解清楚后，針對(duì)單子葉植物對(duì)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化過(guò)程進(jìn)行了適當(dāng)?shù)馗牧?，使?yīng)用此法對(duì)水稻，玉米等單子葉植物的遺傳轉(zhuǎn)化取得了成功。Hiei等[33]利用此法轉(zhuǎn)化粳稻得到了轉(zhuǎn)基因植株； Rashid等[34]、瞿文學(xué)等[35]應(yīng)用此法轉(zhuǎn)化秈稻也相繼取得了成功，Dong等[36]也報(bào)道農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化爪哇稻取得成功，這些研究都有利地證實(shí)了農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻的可行性。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化獲得的轉(zhuǎn)基因植株目的基因拷貝數(shù)少，不易發(fā)生染色體變異，后代性狀遺傳也比較穩(wěn)定。然而由于水稻品種間的遺傳差異比較大，且此方法對(duì)轉(zhuǎn)化受體的基因型依賴性強(qiáng)，從而增大了轉(zhuǎn)化過(guò)程的復(fù)雜性和隨機(jī)性。（2）基因槍轉(zhuǎn)化法 Christou等率先應(yīng)用基因槍法將bar基因轉(zhuǎn)入水稻幼胚，獲得可育的轉(zhuǎn)基因植株 [37]。基因槍法轉(zhuǎn)化水稻周期短而且不受外植體限制，幼胚、成熟胚的胚性愈傷組織，原生質(zhì)體及根尖和芽尖的分生組織等多種外植體都能應(yīng)用基因槍轉(zhuǎn)化法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。目前已有大量的水稻品種采用此法轉(zhuǎn)外源基因獲得了成功。但是轉(zhuǎn)基因植株中外源基因?qū)腚S機(jī)性強(qiáng)，往往以多拷貝形式整合，后代的遺傳穩(wěn)定性較差?；驑尫ㄞD(zhuǎn)化對(duì)細(xì)胞的損傷性大，使很多轉(zhuǎn)化細(xì)胞死亡?；驑尩膬r(jià)格也很昂貴，轉(zhuǎn)化所需成本高。（3） PEG 法 此法是利用高濃度的PEG具有極強(qiáng)的親水性，能使DNA大分子沉淀，促進(jìn)水稻原生質(zhì)體與外源DNA相互靠近并作用，促使原生質(zhì)體直接攝取外源DNA。整個(gè)操作過(guò)程需要的設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低，但原生質(zhì)體分離制備困難，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，培養(yǎng)條件高，且再生頻率低，依賴于基因型等，從而使這一方法的應(yīng)用受到限制。 （4）電激法 此方法是利用瞬間高壓的電脈沖作用于受體細(xì)胞，使受體細(xì)胞表面產(chǎn)生暫時(shí)的孔隙，從而將外源DNA分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的一種方法，也稱為電穿孔法。這種方法與PEG法一樣也是以原生質(zhì)體作為轉(zhuǎn)化受體，因此也具有原生質(zhì)體的分離制備困難，操作周期長(zhǎng)，植株再生率低和基因型依賴性等問(wèn)題。（5）花粉管通道法 此方法是將外源DNA分子在授粉后注射入花粉管，然后沿著花粉管通道進(jìn)入胚囊，轉(zhuǎn)化未成熟的卵細(xì)胞，進(jìn)而借助天然種胚系統(tǒng)形成轉(zhuǎn)基因種胚。謝道昕等應(yīng)用此法將Bt基因成功導(dǎo)入水稻，并獲得了變異的子代[38]。由于該方法可直接在田間進(jìn)行操作，成本低，易于推廣。但這一方法的轉(zhuǎn)化效率低，操作過(guò)程還受開(kāi)花季節(jié)限制，重復(fù)性差，對(duì)后代的篩選工作量很大。（6）其他方法 朱禎將人α干擾素基因應(yīng)用轉(zhuǎn)化脂介導(dǎo)法導(dǎo)入水稻原生質(zhì)體中，獲得了轉(zhuǎn)基因植株[39]；李寶健等運(yùn)用電注射法將外源基因直接導(dǎo)入水稻種胚，獲得轉(zhuǎn)基因植株[40]；楊劍波等人用低能粒子束介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)基因水稻[41]。 轉(zhuǎn)化體的篩選和轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定在轉(zhuǎn)化過(guò)程中，通常將外源基因與篩選標(biāo)記基因共同轉(zhuǎn)化受體，為鑒定轉(zhuǎn)化受體是否轉(zhuǎn)進(jìn)了外源基因，一般通過(guò)對(duì)標(biāo)記基因的檢測(cè)進(jìn)行初步篩選。轉(zhuǎn)入選擇標(biāo)記基因的受體一般表現(xiàn)為對(duì)相應(yīng)的作用底物的抗性，如各種抗生素或除草劑。初篩之后通過(guò)分子生物學(xué)方法進(jìn)一步篩選含目的基因的轉(zhuǎn)基因植株。轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定可以通過(guò)以下5種方法進(jìn)行：（1）報(bào)告基因的酶法檢測(cè)，報(bào)告基因就是一種指示基因，如GFP獨(dú)特的熒光特性，用來(lái)指示是否轉(zhuǎn)入外源基因。（2）PCR法檢測(cè)，提取轉(zhuǎn)基因植株DNA，采用特異引物在體外對(duì)目的基因的DNA片段進(jìn)行特異擴(kuò)增，檢測(cè)是否轉(zhuǎn)入外源基因。（3）Southern雜交，用特異的DNA探針檢測(cè)外源基因在植物中的整合位置及拷貝數(shù)等。（4）Northern雜交，它是檢測(cè)基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)情況，用特定的DNA探針來(lái)檢測(cè)RNA，研究轉(zhuǎn)基因植株中外源基因的表達(dá)及調(diào)控。（5）Western雜交，是一種將蛋白質(zhì)電泳、印跡、免疫測(cè)定融為一體的特異蛋白質(zhì)檢測(cè)方法，能直接顯示目標(biāo)基因在轉(zhuǎn)化體中是否經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯，最終合成蛋白質(zhì)而影響植株的性狀表現(xiàn)，它是檢測(cè)目標(biāo)基因在翻譯水平上的表達(dá)情況。 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化的研究Baba等于1986年通過(guò)PEG法將農(nóng)桿菌原生質(zhì)與水稻原生質(zhì)體介導(dǎo)融合，獲得能表達(dá)胭脂堿的水稻愈傷組織[42]，自此人們開(kāi)始了對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻廣泛的研究。Chan等成功獲得了可遺傳的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化水稻植株 [43]。隨后，Hiei等通過(guò)利用“超雙元”載體和在共培養(yǎng)基中加入乙酰丁香酮等改良了轉(zhuǎn)化條件，從而提高了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻轉(zhuǎn)化頻率[33]。至此，農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)獲得突破性進(jìn)展并日益成熟。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化是農(nóng)桿菌菌株與轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞之間的相互作用，與愈傷組織的培養(yǎng)及農(nóng)桿菌的侵染轉(zhuǎn)化過(guò)程有關(guān)的影響因素，都會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)化效果產(chǎn)生影響。因此，對(duì)整個(gè)遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化是獲得轉(zhuǎn)基因植株的重要條件。影響遺傳轉(zhuǎn)化體系的因素有以下幾個(gè)方面： 農(nóng)桿菌菌株與質(zhì)粒載體目前用于水稻轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌主要菌株有 LBA440 EHA101 及EHA10AGL0 和AGL1。不同農(nóng)桿菌菌株對(duì)水稻愈傷組織的轉(zhuǎn)化能力也是不同的，Hiei等發(fā)現(xiàn) LBA4404 效果優(yōu)于 EHA101[33]；劉巧泉等，易自力等發(fā)現(xiàn)EHA105轉(zhuǎn)化效果優(yōu)于LBA4404和AGL1 菌株[44，45]。王歆等認(rèn)為EHA105轉(zhuǎn)化效果優(yōu)于AGL0[46]。在粳稻遺傳轉(zhuǎn)化中，Hiei等人研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用超雙元載體比用雙元載體有更大的優(yōu)越性[33]。Ramesh等研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用農(nóng)桿菌超雙元Ti質(zhì)粒載體能轉(zhuǎn)化難以轉(zhuǎn)化的秈稻品種[47]。因此，采用超毒力的農(nóng)桿菌菌株和超雙元載體，能夠增強(qiáng)農(nóng)桿菌的侵染能力和TDNA的整合能力，較好地克服了包括水稻在內(nèi)的單子葉植物對(duì)農(nóng)桿菌敏感性差的問(wèn)題。 農(nóng)桿菌Vir區(qū)基因活性的誘導(dǎo)目前，在水稻遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中，對(duì)農(nóng)桿菌 vir 區(qū)基因活性的誘導(dǎo)應(yīng)用較多的是乙酰丁香酮。Stachel 等1985年首次從煙草葉片的傷口誘出液中分離出乙酰丁香酮（AS）和羥基乙酰丁香酮 （HOAS），并證明這些酚類物質(zhì)能激活Ti質(zhì)粒上Vir區(qū)基因的表達(dá)[48]。單子葉植物之所以比雙子葉植物難以轉(zhuǎn)化，可能是由于單子葉植物不能產(chǎn)生酚類物質(zhì)或者產(chǎn)生量不足以形成信號(hào)，因此對(duì)農(nóng)桿菌的侵染不敏感 [49]。Hiei等證明100μM的乙酰丁香酮是粳稻轉(zhuǎn)化的最佳濃度的關(guān)鍵[34]。而Hoque 等研究孟加拉稻轉(zhuǎn)化時(shí)卻發(fā)現(xiàn)200μM 乙酰丁香酮轉(zhuǎn)化效率最高[50]。據(jù)此可以判斷，不同水稻品種使用的最佳 AS 濃度存在差異。此外，侵染過(guò)程中加入肌醇、較高濃度的糖類、較低濃度的 pH 值和較低的共培養(yǎng)溫度等也有利于vir基因的誘導(dǎo)[51]。 培養(yǎng)基成分培養(yǎng)基中各種成分含量的不同對(duì)愈傷組織的生長(zhǎng)至關(guān)重要，因此，選擇恰當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基是良好愈傷組織的獲得，農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的成功與轉(zhuǎn)基因植株再生的基礎(chǔ)條件。目前在水稻組織培養(yǎng)使用的基本培養(yǎng)基有NB、MS、NB5等[52]。其中秈稻以MS[53]、粳稻以NB[54]作為主要的基本培養(yǎng)基。馬炳田等以 N6大量元素、MS微量元素、B5有機(jī)成分組合成 NMB培養(yǎng)基，對(duì)幾個(gè)雜交秈稻親本品種的成熟胚進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，獲得了較高的誘導(dǎo)率[55]?？梢?jiàn)，不同的培養(yǎng)材料對(duì)培養(yǎng)基中各種成分的需求不同，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可以根據(jù)各種不同培養(yǎng)基成分的特點(diǎn)進(jìn)行搭配以組合成新的培養(yǎng)基來(lái)獲得較為理想的培養(yǎng)效果。 愈傷組織的預(yù)處理Stanton認(rèn)為當(dāng)愈傷組織細(xì)胞中處于細(xì)胞周期間期 S和 G2 期的胚性愈傷組織比例最高時(shí)轉(zhuǎn)化效率最高[56]。因?yàn)榧?xì)胞分裂間期染色體解螺旋，以染色質(zhì)形式存在，且S期是細(xì)胞DNA復(fù)制期，此時(shí)轉(zhuǎn)化有利于 TDNA插入水稻基因組中，增加遺傳穩(wěn)定性。鄭杰認(rèn)為繼代培養(yǎng) 67d的愈傷組織用于轉(zhuǎn)化時(shí)轉(zhuǎn)化率最高[57]。因此對(duì)愈傷組織進(jìn)行適當(dāng)?shù)睦^代和預(yù)培養(yǎng)，可增加胚性愈傷組織比例，提高轉(zhuǎn)化率。 農(nóng)桿菌懸浮侵染環(huán)境不同的懸浮侵染環(huán)境對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響是比較大的，在大多數(shù)的轉(zhuǎn)化方法中農(nóng)桿菌懸浮于 AAM 培養(yǎng)基中用于侵染愈傷組織。不過(guò)，向殿軍等認(rèn)為將 MS培養(yǎng)基 和 YEB培養(yǎng)基按3：1比例混合，用于懸浮菌體來(lái)侵染愈傷組織，不但能較好地控制農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，而且愈傷轉(zhuǎn)化率也要高于單獨(dú)使用其它培養(yǎng)基[58]。% Tween20也可以提高愈傷組織的轉(zhuǎn)化頻率[59]。 共培養(yǎng)環(huán)境和時(shí)間王彩芬等認(rèn)為在26℃共培養(yǎng)2d的抗性愈傷組織頻率最高，若時(shí)間太長(zhǎng)，農(nóng)桿菌難以抑制，脫菌困難 [60]。孫建昌等認(rèn)為在22℃共培養(yǎng) 3d 后，獲得的抗性愈傷組織最多，效果最好[61]。王志成等認(rèn)為在共培養(yǎng)的培養(yǎng)基上覆蓋1張干燥無(wú)菌濾紙,將愈傷組織放置在濾紙上以后再在愈傷組織周圍滴加12滴AAM培養(yǎng)基的共培養(yǎng)方式為最佳[56]。 共培養(yǎng)后農(nóng)桿菌的抑制農(nóng)桿菌與愈傷組織共培養(yǎng)后農(nóng)桿菌的去除與抑制對(duì)轉(zhuǎn)化效率有著極大地影響。目前常用的方法是用滅菌蒸餾水洗脫并在最后幾次洗脫時(shí)加入抗生素抑制，同時(shí)在篩選培養(yǎng)基中加入抗生素抑制。共培養(yǎng)后農(nóng)桿菌用小劑量的抗生素難以除去，加大劑量雖然能有效地除去農(nóng)桿菌，卻嚴(yán)重?fù)p害了愈傷組織導(dǎo)致愈傷組織的褐化死亡，影響轉(zhuǎn)化率。因此篩選培養(yǎng)基中合適的抗生素濃度是提高轉(zhuǎn)化效率的一個(gè)關(guān)鍵。向殿軍等采用將共培養(yǎng)后的愈傷組織洗菌并干燥3d進(jìn)行抑菌，轉(zhuǎn)化率均高于培養(yǎng)基加抗生素抑菌[55]。孫建昌等研究發(fā)現(xiàn)在洗菌后愈傷組織轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基之前，對(duì)愈傷組織進(jìn)行干燥處理，可以有效地降低篩選過(guò)程中農(nóng)桿菌的過(guò)度生長(zhǎng)，起到抑菌的作用，降低污染率，因此采取在超凈工作臺(tái)上吹2h左右至愈傷組織干燥來(lái)抑菌[61]。石少華等通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)農(nóng)桿菌的耐受溫度低于 38℃，水稻愈傷組織培養(yǎng)溫度可以高于 38℃，從而設(shè)想在農(nóng)桿菌介導(dǎo)進(jìn)行水稻遺傳轉(zhuǎn)化操作中，采用高溫培養(yǎng)愈傷組織抑制農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，從而少加或不加抗生素 [62]。 篩選標(biāo)記基因以及篩選劑的選擇在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化中，成功的篩選就是能有效地區(qū)分轉(zhuǎn)化成功與非成功的愈傷組織，并產(chǎn)生較少的假陽(yáng)性植株。因此，在構(gòu)建載體時(shí)要選擇合適的篩選標(biāo)記基因，在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化后確定相適應(yīng)的篩選劑，篩選濃度及篩選時(shí)間。易自力等人通過(guò)比較3種篩選劑的作用效果，結(jié)果表明秈稻品種的篩選以hyg B作為篩選劑最適合[46]。周玲艷等人也比較了hyg B和PPT對(duì)愈傷組織的篩選的效果，結(jié)果表明hyg B篩選效果更好 [63]。潮霉素能有效篩選水稻轉(zhuǎn)化與非轉(zhuǎn)化的愈傷組織，并且不易產(chǎn)生白化苗[64]。所以hpt基因是農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化中最為有效的選擇標(biāo)記基因之一，而hy