【文章內容簡介】 蝶蘭組織培養(yǎng)快繁的報道[22 25]很多，大多集中在種子、花梗腋芽、莖尖、葉片、花梗節(jié)間等不同外植體的試管建成，叢生芽及圓球莖增殖的影響因素，外部因素對外植體褐化的影響等方面，而關于蝴蝶蘭組織培養(yǎng)快繁中生根壯苗的研究則報道較少。生根培養(yǎng)的成功與否不僅直接決定蝴蝶蘭瓶苗生產的成敗，組織培養(yǎng)苗生根狀態(tài)對蝴蝶蘭幼苗移栽的成活率及生長狀況也有至關重要的影響。因此，進行組織培養(yǎng)生根條件優(yōu)化的探索具有重要意義。本試驗就影響蝴蝶蘭瓶苗生根的NAA質量濃度進行了研究，以期得到較為優(yōu)化的生根壯苗培養(yǎng)條件，為蝴蝶蘭的高效繁殖及規(guī)?；a提供理論依據。具體研究思路如下：（1） 培養(yǎng)基的配置：配置2/3MS培養(yǎng)基，，另外設置一組不加NAA作為對照；（2） 培養(yǎng)基污染的檢查：將培養(yǎng)基放入冷凝室放置一個星期以上，取無污染切凝固良好的各種NAA濃度培養(yǎng)基各7瓶以上，作為接種所用。（3） 材料選?。喝⌒螒B(tài)大小，生長狀態(tài)基本一致的蝴蝶蘭2個品種TR1001，TR1002，作為實驗所用材料。（4） 接種：在無菌超凈作臺上進行接種，每一NAA接種7瓶以上，接種過程中要將蝴蝶蘭根切凈但不能切除生長點。（5） 培養(yǎng)：將接種好的材料放入組織培養(yǎng)室進行培養(yǎng)。（6） 觀察：每隔2個星期進行觀察拍照，2個月后進行出瓶，切下長出的新根數(shù)根數(shù)，量長度，測鮮重，并列表記錄。（7） 獲得實驗結果：分析所得數(shù)據，得出適合蝴蝶蘭生長的最適NAA質量濃度2 材料與方法 實驗器材YXQLS18SI型高壓滅菌鍋；SA16002雙人水平超凈工作臺；JZ100B接種器具殺菌器；植物光照培養(yǎng)室（光照強度：1600lx；光照時間：9h；培養(yǎng)溫度：25℃）；電子分析天平；照相機；尺子；鑷子*3；解剖刀*3；酒精燈；托盤。 實驗材料（1）江蘇同人生物有限公司提供的兩種蝴蝶蘭TR1001（大葉瑞麗）和TR1002（鼎漢火焰）作為實驗材料。（2）分析純瓊脂，分析純蔗糖。 實驗試劑（1）1mol/ml HCL溶液，1mol/ml NaOH 溶液，用作調節(jié)培養(yǎng)基pH值。
（2）大量元素溶液（NH4NO3；KNO3；CaCl22H2O；MgSO47H2O；KH2PO4）；微量元素溶液（KI；H3BO3；MnSO44H2O；ZnSO47H2O；Na2MoO42H2O；CuSO45H2O；CoCl26H2O）；有機物溶液（肌醇；ⅣB煙酸；鹽酸吡哆醇(維生素B6)；鹽酸硫胺素(維生素B1)；甘氨酸）；鐵鹽（FeSO47H2O；Na2EDTA2H2O）。（以上溶液所含物質濃度單位均為mg/L）
（3）1mg/ml的NAA溶液。 實驗過程與步驟 實驗過程本實驗是以蝴蝶蘭品系TR100TR1002，組織培養(yǎng)增殖的不定芽為材料，研究NAA質量濃度對蝴蝶蘭試管苗生根的影響。實驗首先要配置2/3MS培養(yǎng)基和加入了不同質量濃度NAA的2/3MS培養(yǎng)基，然后經過一個星期的冷凝方能使用。培養(yǎng)基冷凝期間可進行蝴蝶蘭TR100TR1002這兩種材料的選擇，材料選擇完成后便可進行材料的接種過程。之后將接種好的材料放入組織培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每隔2個星期進行材料的拍照觀察過程。培養(yǎng)時間達到2個月后，就可進行出瓶，將每瓶苗進行切根處理，并數(shù)出每根苗的新生根數(shù)，量出新生根根長和鮮重，進行記錄。將記錄好的數(shù)據繪制成表格，經分析處理得出結論。 實驗步驟培養(yǎng)基的配置：（1）2/3MS培養(yǎng)基是以各種大量元素溶液和微量元素溶液按一定質量濃度比混合，再加入各種有機物溶液和鐵鹽、分析純瓊脂、分析純蔗糖，然后經瓶裝、凝固而成。配置過程中，要保證培養(yǎng)基為偏酸性，否則無法凝固或凝固太徹底。因此，配置過程中要經常測量其pH值，若過酸，則加入少量NaOH（1mol/ml），若過堿，則加入少量HCl（1mol/ml）。（2）本實驗所用培養(yǎng)基是在2/, , ，另設置一組不加NAA的培養(yǎng)基作為對照。每一NAA濃度培養(yǎng)基不能少于7瓶，以防止培養(yǎng)基污染和接種污染而導致實驗材料過少。 （3）將配置好的培養(yǎng)基經高壓滅菌鍋滅菌后放入冷凝室，放置一個星期以后方能使用，以防止培養(yǎng)基污染而對材料造成浪費，從而影響實驗結果。材料選?。海?）選取無污染且凝固良好瓶裝數(shù)量相近的培養(yǎng)基作所為實驗所用，以盡量減少實驗的影響因素。（2）選取長勢良好且葉片大小相近的蝴蝶蘭TR100TR1002，以防止材料不一致對實驗結果造成影響。接種：本步驟需在無菌室的超凈工作臺上進行。將材料切好后，接入培養(yǎng)基中，每瓶接入5株。每個濃度接種7瓶，一共56瓶。接種完畢后，貼上標簽。送入植物光照培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：光照強度：1600lx。光照時間：9h。培養(yǎng)溫度：25℃。接種過程中應注意的事項如下：（1）接種進行前水平超凈工作臺要用75％的消毒酒精擦凈；（2）接種器具殺菌器要讓其升溫至280℃以上才能使用，且鑷子和解剖刀需要在280℃以上的殺菌器中殺菌2min以上才能使用；（3）托盤需要在酒精燈上灼燒消毒5min以上才能使用；（4）培養(yǎng)基、蝴蝶蘭材料在放入工作臺上之前均需要用蘸有消毒酒精的抹布擦拭消毒，且均需要在酒精燈上烤燒片刻方能開瓶使用；（5）接種過程中，蝴蝶蘭根系必須要切凈。接種時鑷子、解剖刀頭部均不能挨到工作臺，蝴蝶蘭也不能挨到培養(yǎng)基瓶口和掉落到工作臺上，否則不能使用。（6）蝴蝶蘭接入培養(yǎng)基中后，培養(yǎng)基瓶蓋必須要擰緊，以防止細菌污染。培養(yǎng)觀察與結果統(tǒng)計（1）實驗觀察：培養(yǎng)期間定期觀察生長狀態(tài)，剔除污染死亡的植株并記錄。（2）結果統(tǒng)計：將蝴蝶蘭從瓶中夾出，數(shù)出每株根數(shù)，最長根根長，每