利用基因重組技術生產制備人生長激素(編輯修改稿)
2024-12-13 22:21 本頁面
【文章內容簡介】 體細胞 (宿主細胞 )中 ,使其能在細胞中復制和增殖 , 形成重組 DNA 的無性繁殖系 (即克隆 ), 從而擴增產生大量特定目的基因 , 并使之得到表達 , 即能指導蛋白質的合成。 最后從大量 菌中設法篩選出帶有目的基因的重組菌 (克隆株系 ), 并進行鑒定。然后培養(yǎng)克隆株系 , 提取出重組質粒 , 分離已經得到擴增的目的基因 , 再分析測定其基因順序。將目的基因克隆到表達載體上 , 再次導人到受體菌中 , 經反復篩選、鑒定和分析測定 , 最終獲得較穩(wěn)定的高產的基因工程菌 , 然后進行大量培養(yǎng)繁殖 , 產生出所需要的目的基因產物 , 再進行分離純 化 。 圖 1 基因重組過程圖 [3] 四 .利用基因工程技術生產人生長激素的工藝流程 轉化混合物 基因工程細胞 擴大培養(yǎng) 陽性轉化體 hGH 精品 hGH 粗品 培養(yǎng)液 分離 精制純化 濃縮、凍干 pGH4,pXMT,pSV2neo 限制性 DNA 片段 酶切 重組 hGH 成品 克隆化分離鑒定 pSMG1和 pSMG2 轉化 篩選 圖 2 人生長激素制備工藝路線圖 五 .用基因工程技術生產人生長激素的工藝過程 (一 )重組質粒的構建 1． 將質粒 pGH4 先用 EcoRI 進行切割，產生 2 個線性片段，然后再用 BamHI酶切，用瓊脂糖凝膠電泳進行片段分離，并用標準分子質量 DNA 片段作對照，回收 的 DNA 片段，即得 hGH 目的基因 片段 同樣用 EcoRI 先 酶切質粒 pXMT，得到 1 個線性片段，然后再用 BglⅡ酶切產生 2 個限制性片段，用瓊脂糖凝膠電泳進行片段分離，并用標準分子質量 DNA 片段作對照，回收 的 DNA 片段，即得含金屬硫蛋白（ Metallothionein MT）啟動子的 DNA 片段 PSV2neo是一個載體 DNA，將其用酶切即得線性載體分子。將上述得到的 、 3個 DNA線性片段混合，加含 ATP的 TEN緩沖液，再加入 T4DNA連接酶，混勻， ℃反應連接 18～ 24h，反應完成后于 65℃加熱 10min，再置冰浴降溫，得重組質粒 pSMGH 混合物。因為 BamHI 和 BglⅡ為同尾酶，因此這兩個酶進行酶切后的黏性末端能夠配對連接，然后再與線性載體連接，由于金屬硫蛋白（ MT）啟動子基因能以不同插入方向 連接，故可得到 pSMGH1 和 pSMGH2 兩種重組質?；旌衔铮瑢⑦B
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