基因重組蛛絲蛋白聚乙烯醇復(fù)合支架材料的制備(編輯修改稿)
2025-06-09 23:41 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 好的生物相容性、生物降解性、韌性及高強(qiáng)度，可廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，如酶固定[4]、人造血管[5]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)[6]、肌腱[7]與韌帶組織工程[8]等。天然蜘蛛絲是一種特殊的絲纖維蛋白，高強(qiáng)度、高韌性和高彈性等優(yōu)良性質(zhì)使其成為近年來生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。天然蛛絲蛋白的獲得并非易事，基因工程技術(shù)為獲取重組蛛絲蛋白開拓了渠道。本室曾報(bào)道成功地將RGD（精氨酸甘氨酸天冬氨酸）三肽與蛛絲蛋白基因融合表達(dá)，從而規(guī)模化地獲得重組蛛絲蛋白[9,10]。本實(shí)驗(yàn)以基因重組蛛絲蛋白為基礎(chǔ)原料，采用冷凍干燥粒子濾瀝法制得重組蛛絲蛋白/聚乙烯醇（PVA）復(fù)合支架材料，探討致孔劑NaCl粒徑和比例、變性劑以及PVA等因素對(duì)支架形態(tài)及性能的影響。材料與方法一、材料：重組蛛絲蛋白（本室自制），98%甲酸及甲醇（分析純，上海化工廠）、乙醇（分析純，廣東汕頭西隴化工廠）、聚乙烯醇(PVA11PVA124) （分析純，廣州新易化工有限公司）。: Lyolab 3000冷凍干燥儀（丹麥Heto公司）、BH2顯微鏡（日本Olympus公司）、KYKY AMRAY1000B掃描電子顯微鏡（中國(guó)科學(xué)院儀器廠）、YP202N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。二、方法1. 重組蛛絲蛋白聚乙烯醇多孔復(fù)合支架的制備：取一定量?jī)龈傻闹亟M蛛絲蛋白粉溶解于98%甲酸，配成30%的重組蛛絲蛋白甲酸溶液，與10%(w/v)PVA溶液按一定體積比混合后，再按比例（重組蛛絲蛋白與NaCl的質(zhì)量比為1：1）加入NaCl顆粒，混合均勻。所得混合液倒入膜具（1 cm3 cm），經(jīng)55℃干燥、甲醇或乙醇變性、單蒸水浸泡瀝鹽、冷凍干燥，即得重組蛛絲蛋白聚乙烯醇多孔復(fù)合支架。2. 復(fù)合支架的表征: (1)掃描電子顯微鏡觀察:支架材料表面噴金，掃描電子顯微鏡下觀察。(2)機(jī)械性能測(cè)定:用YG001單纖維強(qiáng)力試驗(yàn)機(jī)測(cè)定支架材料的拉伸斷裂比強(qiáng)度、拉伸斷裂伸長(zhǎng)率、拉伸斷脫比功、拉伸斷脫伸長(zhǎng)率。結(jié) 果:分別以甲醇和乙醇為變性劑，探討其對(duì)支架力學(xué)性能的影響，結(jié)果見表1?？煽闯鲆掖甲髯冃詣r(shí)，支架材料的斷裂應(yīng)力、斷裂比強(qiáng)度均為以甲醇為變性劑的5倍，%，以甲醇作變性劑時(shí)，%。表1 變性劑對(duì)共混多孔支架材料力學(xué)性能的影響T項(xiàng)目變性劑甲醇乙醇斷裂應(yīng)力（cN/ mm2）7994184斷裂比強(qiáng)度（cN/dtx）斷裂伸長(zhǎng)率（%）2. NaCl顆粒大小對(duì)共混多孔支架材料力學(xué)性能的影響:以不同粒徑大小NaCl顆粒做致孔劑，多孔支架材料的孔徑均可以達(dá)到100μm左右，但粒徑小于500μm的NaCl顆粒制得的支架孔徑較為均一，連通性較好。見圖1。 ＞500μm B. 粒徑＜500μm 圖1 不同大小NaCl顆粒為致孔劑的共混多孔支架掃描電鏡 cN/d
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