基因重組技術生產胰島素(編輯修改稿)
2025-01-25 18:01 本頁面
【文章內容簡介】 此將豬胰島素在體外酶促轉化為人胰島素不失為一種選擇 。 2. 人胰島素的生產方法 迄今為止，有四種大規(guī)模生產人胰島素的方法： 2. 人胰島素的生產方法 迄今為止，有四種大規(guī)模生產人胰島素的方法： 上述思路的技術路線是：在 pH為 67的有機相中使 胰蛋白酶催化 其逆反應 ， 該酶在過量的蘇氨酸叔丁酯的存在下 ， 將豬胰島素 B鏈 C末端的丙氨酸交換下來 ， 所形成的人胰島素叔丁酯再用三氯乙酸脫去叔丁酯基團 ， 最終獲得人胰島素 。 該過程的總轉化率為 60%， 但工藝路線耗時 ， 分離純化操作復雜 ， 產品的價格不菲 。 （ 3）化學轉型法制人胰島素 2. 人胰島素的生產方法 迄今為止，有四種大規(guī)模生產人胰島素的方法： 1982年 ， 美國 Ely LiLi公司首先使用重組大腸桿菌生產人胰島素 ， 成為世界上第一個上市的基因工程藥物 。 1987年 ， Novo公司又推出了利用重組酵母菌生產人胰島素的新工藝 。 （ 4）基因工程法制人胰島素 上述由基因工程菌合成的重組人胰島素在體外 胰島素 受體結合性能 、 淋巴細胞和成纖維細胞的應答能力 、 降血糖作用 、 血漿藥代動力學 等指標上均與天然胰島素沒有任何區(qū)別，而且還具有 無免疫原性 、 注射吸收迅速等 優(yōu)點，充分展示了基因工程在生物醫(yī)藥領域中的巨大潛力。 2. 人胰島素的生產方法 迄今為止，有四種大規(guī)模生產人胰島素的方法： （ 4）基因工程法制人胰島素 3. 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構建 （ 1） A鏈和 B鏈分別表達法 化學合成 : A、 B鏈的編碼序列 ta cta cta cta c? Gal? Gal ? Gal? GalA peptideA peptideB peptideB peptideoriori orioriAprAprAprAprMe tMe t Me tMe tMe tMe tMe tMe tMMMMNN CCMMMMNN CC表達產物的后處理路線： MMMMNN CCMMMMNN CC? Gal? Gal ? Gal? GalAA BBCNBr 處理CNBr 處理NN CCSSSSSSSSCCNNSS SSNNCCNN CC NN CCNN CCC y s 體外氧化和重折疊C y s 體外氧化和重折疊分離純化分離純化處理處理（ 1） A鏈和 B鏈分別表達法 生產技術的評價： 由于 A鏈和 B鏈上共存在六個半胱氨酸殘基 ，體外二硫鍵的正確配對率較低 ， 通常只有 10% 20%， 因此采用這條工藝路線生產的重組人胰島素每克成本高達 100美元 以上 。 為了進一步降低生產成本 ， 美國 Ely LiLi公司隨后又建立了第二條生產重組人胰島素的工藝路線 。 （ 1） A鏈和 B鏈分別表達法 （ 2）人胰島素原表達法 3. 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構建 ta cta cMe tMe t? Gal? GalC peptid eC peptid eorioriAprAprMe tMe tMMMMNN CCB peptid eB peptid eA peptid eA peptid e人胰島素原的 cD NA人胰島素原的 cD NA 重組人胰島素原重組人胰島素原轉化轉化分離純化分離純化人胰島素原的人胰島素原的 重組人胰島素原重組人胰島素原人胰島素原的人胰島素原的 重組人胰島素原重組人胰島素原（ 2）人胰島素原表達法 表達產物的后處理路線： SSSSSSSSCCNN胰蛋白酶胰蛋白酶C pept id eC pept id eA pept id eA pept id eB pept id eB pept id eMMRRRRKKRRCNBrCNBrRRSSSSSSSSCCNNNNCCSS SSSS SSRR羧肽酶 B羧肽酶 B 二硫鍵的正確配對率相應提高 ， 折疊率高達80%以上 。 雖然這條工藝路線并不比 AB鏈分別表達法更為簡捷 ， 而且還要使用兩種高純度的酶制劑 ，但理想的折疊率在很大程度上彌補了工藝繁瑣的缺陷 ， 使得每克最終產品的成本僅 50美元 。 目前美國 Ely LiLi公司采用此工藝年產 十幾噸的重組人胰島素 。 （ 2）人胰島素原表達法 生產技術的評價： （ 3） A鏈和 B鏈同時表達法 3. 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構建 tactac? Gal? GalorioriAprAprMe tMe tMe tMe tMMMMNN CCB pepti d eB pepti d eA pepti d eA pepti d e化學合成 AB 鏈編碼序列化學合成 AB 鏈編碼序列重組人胰島素重組人胰島素轉化轉化分離純化分離純化CNBr 處理CNBr 處理特異性裂解特異性裂解體外折疊體外折疊重組人胰島素重組人胰島素處理處理（ 4）分泌型重組人胰島素表達法 上述三種重組大腸桿菌的構建路
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