【文章內(nèi)容簡介】 多糖可作為I細胞活性增強劑從而有抗腫瘤作用。菊苣根多糖的促誘發(fā)I 擾素作用是通過免疫途徑抗腫瘤的另一機制。研究表明，菊苣根多楠有促誘生干擾素作用。是理想的十擾素誘生劑文蝓已證實菊苣根多糖臺抗感染(特別是抗病毒)增強機體抑抗力，抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用，這與干擾素的生物活性非常相似。 對細胞信使系統(tǒng)的影響腫瘤細胞膜的許多表變化，例如腫瘤細胞膜唾液酸含暈的變化與腫瘤K系密切莉等的研究證實菊苣根多糖可以提高唾液酸(sA)細胞膜表面含帚，從而改變細胞膜的生化特性，可能與抗腫瘤特定聯(lián)系。磷脂酰肌醇(PI)的轉(zhuǎn)換是影響抗腫瘤作用的機理。磷酯酰肌醇存在TItt胞膜與內(nèi)質(zhì)上，在其激酶催化r發(fā)生磷酸化反應的過程稱為磷酯酰肌醇的轉(zhuǎn)換。某些腫瘤細胞膜磷酯酰肌醇轉(zhuǎn)換明顯增加刺血加多糖對腫瘤細胞磷酯酰肌醇轉(zhuǎn)換有抑制作用另有報道。磷酯酰肌醇轉(zhuǎn)換增強還與羰基有關，黃添友等 研究顯示菊苣根多糖能顯著抑制S細胞膜磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換。 對細胞膜脂肪酸組成的影響脂肪酸是生物膜的主要組成成分，對膜結(jié)構與功能的維護起重要作用。腫瘤細胞膜脂肪酸組成明顯異常，與腫瘤細胞膜的許多表型改變及伴隨的惡性行為密切相關。咚麗等用毛細管柱氣相色譜法分析了ASPS作用后S180細胞磷脂和中性脂的脂肪酸組成變化。實驗結(jié)果表明，ASPS作用后，膜中性脂肪酸組成無明顯變化，但膜鱗脂脂肪酸組成發(fā)生顯著改變。豆落酸(C14,0)、花生四烯酸(C20,4})二種脂肪酸降低，與對照組相比具有顯著差異。尤其是花生四烯酸降低更為明顯?；ㄉ南┧崾歉叨炔伙柡椭舅?，易被細胞內(nèi)自由基攻擊，發(fā)生過氧化反應，產(chǎn)生具有致癌作用和促進腫瘤生長的毒性物資丙二醛(MDA)。降低腫瘤組織中花生四烯酸含量，減少自由基損傷，具有一定的抗腫瘤作用。黃添友等用放射自顯影方法測定ASPS對S180細胞膜肌醇磷脂變化。結(jié)果表明，ASPS對S180細胞膜PI轉(zhuǎn)換具有顯著抑制作用，并與ASPS濃度相關。當ASPS濃度為lml/L時，PI轉(zhuǎn)換抑制率為25，當濃度為100m1/L時，抑制率達53，當濃度為1000m1/L時，抑制率為g200。表明ASPS對膜PI轉(zhuǎn)換具有顯著抑制作用。有資料顯示，某些腫瘤細胞PI轉(zhuǎn)換增強，而且在腫瘤形成早期也發(fā)現(xiàn)PI激酶活性增加，PI轉(zhuǎn)換增強與癌基因有關，許多癌基因編碼產(chǎn)物EGF,PDGF,TGF等也促進PI轉(zhuǎn)換，提示這種轉(zhuǎn)換是腫瘤細胞的一個特征性生化改變。 菊苣根多糖是一種免疫活性多糖，通過對機體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，增強機體的免疫功能而實現(xiàn)抗腫瘤作用，被認為是抗腫瘤作用機理之一。另一方面，菊苣根多糖對腫瘤細胞膜磷脂、不飽和脂肪酸以及肌醇磷脂代謝等膜生化特性的影響，說明其抗癌作用是通過多途徑而實現(xiàn)的。臨床上，菊苣根多糖可減輕由環(huán)磷酞胺引起的毒副反應，并對因骨髓移植而致免疫缺損有重建作用，為菊苣根多搪臨床應用開辟了廣闊的前景。菊苣根多糖具有增強機體的體液和細胞免疫功能。袁學干等以環(huán)磷酰胺l00mg∕kg制造出了免疫抑制小鼠模型，實驗結(jié)果表明單用菊苣根多糖可明顯增強小鼠脾臟和腸系膜淋巴細胞數(shù)目，脾臟白髓總體積和淋巴皮質(zhì)總體積也有所增加，從而證實了菊苣根多糖能使免疫器官細胞數(shù)目增加[32]，謝氏等報道菊苣根多糖能使小鼠l 分泌細胞顯著增加菊苣根多糖對免疫抑制及放射線引起的白細胞降低有明顯的保護作用。菊苣根多糖是理想的免疫增強劑，它可以促進細胞、B細胞、NK細胞等細胞因子的產(chǎn)生。 多糖的幾種提取方法熱水浸提法是多糖提取的傳統(tǒng)方法，用水作為溶劑浸取多糖，溫度一般控制在50~90℃，在恒溫水浴上回流浸提2~4h過濾后的濾液和濾渣。在用水在相同條件下將濾渣反復提取35次，最后合并濾液。此法操作簡便，但由于水做溶劑難以完全溶出其中的多糖物質(zhì)，所以一般需要多次浸提，操作時間長。 酸浸提發(fā) 該法的浸提過程是在酸性條件下完成的，實際操作過程如下：，然后置于90℃恒溫水浴中浸提1~4h，用堿中和過濾，濾渣加鹽酸溶液反復浸提2~3次，最后合并濾液。 超聲波提取法這種方法是利用超聲波對細胞組織的破碎作用過來提高的破碎作用過來提高糖類在提取液中的溶解度和浸出率，從而有利用提高多糖的提取率。操作時，先將原料放入浸提液，經(jīng)超聲波處理一段時間后，過濾，既的糖類提取液。 超臨界萃取法利用CO2等氣體在超臨界的條件下呈現(xiàn)特殊的液相特性，來提取原料中的糖類物質(zhì)。這種方法對物質(zhì)活性的保存率很高，但成本較高，目前大多用于價值較高的成分的提取 研究意義菊苣根多糖作為菊苣根中主要的活性成份之一，因其顯著的抗腫瘤，抗癌作用一直被國內(nèi)外所關注并且不斷的研究當中[27]，本論文主要研究多糖提取，在水浴提取過程中溫度，時間，料液比對菊苣根多糖提取率的影響，并用苯酚硫酸法測定了其產(chǎn)品含量。通過驗證結(jié)果顯示其簡便，準確。本論文為以后進一步研究菊苣根多糖結(jié)構奠定基礎，也進一步開發(fā)菊苣根多糖產(chǎn)品提供了理論依據(jù)以及廣闊的市場經(jīng)濟前景，其實驗數(shù)據(jù)及實驗方法也為其他領域的研究提供了平臺和參考。第三章 實驗部分 原料菊苣根，由長春工業(yè)大學功能食品與生物技術研究所提供。（1）FREEZONE12真空冷凍干燥機，LABCONCO公司；（2）DHG9140A電熱恒溫鼓風干燥機，上海一恒科技有限公司；（3）AB104N電子分析天平，梅特勒托利多儀器（上海）有限公司；（4）WZ01B 恒溫水浴鍋，上海申盛生物技術有限公司；（5）SZ93旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；（6）752型紫外光柵分光光度計，上海第三分析儀器廠；（7）RC3BPLUS冷凍離心機，美國Du Pont公司；（8）7901型 磁力攪拌器，上海華光儀器儀表廠；（9）HZ 全溫振蕩器， 哈爾濱東聯(lián)電子技術開發(fā)有限公司；（10）F210Z微型粉碎機，北京東科技術有限公司；（11）RE5298旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海金鑫科技儀器有限公司；（12）SHBⅢ循環(huán)水式多用真空泵，天津榮盛儀器廠；（1）無水乙醇（分析純） 北京化工廠；（2）氯仿（分析純） 天津福晨化學試劑廠；（3）正丁醇（分析純） 北京化學試劑公司；（4）丙酮（分析純） 上?；瘜W試劑公司；（5）石油醚（分析純） 上?；瘜W試劑公司；（6）苯酚（分析純） 陽市東興試劑廠；（7）硫酸（分析純） 蘇州益民化工廠；（8）葡萄糖（標準品） 哈爾濱市化工試劑廠；（9）固體苯酚（標準品） （10）鋁片（標準品）（11）碳酸氫鈉（分析純） 北京化工廠；（12）95﹪乙醇（化學純） 沈陽市試劑五廠；（13）氫氧化鉀(分析純) 北京化工廠；（14）氫氧化鈉（分析純） 北京化學試劑公司；（1）原理苯酚硫酸試劑可與游離的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起顯色反應。己糖在490nm處（戊糖及糖醛酸在480nm）有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關系[27]。（2）葡萄糖標準曲線的繪制精確稱取105℃，加入適量蒸餾水溶解，定量轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻；,,，，搖勻，放置至室溫，再加入6%，搖勻，放置20min后于490nm測吸光度。（3）換算因子的測定精確稱取冷凍干燥恒重的菊苣根多糖30mg，水溶解后定容到100ml容量瓶中，搖勻，作為多糖儲備液。精確吸取多糖儲備液2ml，搖勻，放置至室溫，再加入6%，搖勻，放置20min后于490nm測吸光度。計算公式如下：F= （公式31）式中：W——多糖重量（mg）；C——多糖溶液中葡萄糖的含量（μg）；D——多糖的稀釋倍數(shù)。（4）多糖含量的測定 分別精確稱取菊苣根粉末10g，取其中30mg溶解至100ml容量瓶中，定容，搖勻成為樣品液。測定時，精確吸取樣品液2ml，按測定標準曲線同樣方法測其吸光度值。 計算多糖含量。計算公式如下： T=f100% （公式32）式中：T——多糖含量（%）；C——樣品溶液的葡萄糖重量（μg）；D——樣品溶液的稀釋倍數(shù)；f——換算因子；W1——樣品的重量（mg）。 多糖提取率的計算多糖提取率= （公式33）式中：H—粗多糖的重量（g）；T—多糖含量（%）；W2—菊苣根粉末重量。（1）烘干：將菊苣根切片在105℃條件下烘干8小時（2）粉碎：用F210