【文章內容簡介】 的無色物質，與3,5二硝基苯甲酸的堿性實際發(fā)生顯色反應，反應液呈紫紅色，故可用分光光度計來測量穿心蓮內酯含量。但是為了提高測定的靈敏度，需要準確控制顯色時間和顯色劑用量[16]。 活性炭脫色活性炭是一種黑色粉狀，粒狀或丸狀的無定形具有多孔的碳，主要成分為碳，含少量氧、氫、硫、氮、氯。具有較大的表面積，有很強的吸附性能，能在它的表面上吸附氣體、液體或膠狀固體，常用于氣體的吸附、分離和提純，溶劑的回收和油脂、甘油、藥物的脫色劑。活性炭在水中脫色效果最強，有機溶劑中較弱。~3%（w/v），脫色時間一般為30~60min，使用溫度在75~80℃比較好。要注意不可在沸騰的溶液中加入活性炭，會產生暴沸的可能。另外，有色雜質雖可溶于沸騰的溶劑中，但當冷卻析出結晶體時部分雜質又會被結晶吸附，使得結晶帶色，所以用活性炭脫色要等固體物質完全溶解后再加。 實驗步驟 含量測定方法⑴ 對穿心蓮內酯對照品溶液()進行最大吸收波長掃描，后得出穿心蓮內酯的最大吸收波長在226nm處，與參考文獻比較后結果相近，所以選擇此波長為穿心蓮內酯的測試波長。結果見圖31。圖31 穿心蓮內酯吸收光譜圖⑵ 此處采用比色法測定穿心蓮內酯濃度。事先配制好需要測吸光度的提取液10mL：稀釋好的穿心蓮內酯提取液1mL，加入1%3,5二硝基苯甲酸2 mL，,60%乙醇溶液4 mL，靜置15s后用60%乙醇定容至10 mL，搖勻，在紫外可見分光光度儀上226nm出比色，測定吸光度。 標準曲線的繪制⑴ 標準液的配備：精密稱取穿心蓮內酯對照品（在105℃下干燥至恒重）20mg，加95%乙醇完全溶解，轉移到容量瓶中并定容至100mL。⑵ 測量：精密量取標準液0、、,分別加入10mL容量瓶中，依次標號7。各加入60%乙醇2 mL，1%3,5二硝基苯甲酸2 mL，搖勻，靜置15后以60%乙醇定容至刻度，搖勻。以1號管為對照，分別在分光光度計上226nm處測量吸光度，并繪制標準曲線。曲線以穿心蓮內酯濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標。 單因素試驗 取穿心蓮的干燥莖干為原料，挑去雜質，粉碎后備用。⑴ 以超聲震蕩時間為單因素變量精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，再各加入50mL75%乙醇，置于超聲波清洗器中，設置溫度為40℃，超聲功率100W，分別在60、80、100、120min時取出，依次用真空抽濾，再加入活性炭，30℃水浴10min脫色，抽濾，將濾液標號并用75%乙醇定容至250mL。，計算穿心蓮內酯的相對含量。⑵ 以超聲功率為單因素變量 精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，再各加入50mL75%乙醇，設置反應溫度為40℃，分別在80、100、11160、180瓦的功率下震蕩20min。震蕩結束后依次抽濾，再加入活性炭30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標號，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。，計算穿心蓮內酯的相對含量。⑶ 以料液比為單因素變量 精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，在各瓶中加入25mL、50mL、75mL、100mL、125ml、150ml75%乙醇，設置超聲功率100瓦，超聲溫度40℃，然后放置于超聲波清洗器中震蕩20min。震蕩結束后依次抽濾，再加入活性碳30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標號，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。，計算穿心蓮內酯的相對含量。⑷ 以不同溶劑為單因素變量精確稱取5g穿心蓮粉4份，分別加入250mL錐形瓶，再依次加入水、75%乙醇、乙酸乙酯、石油醚各50mL，設置超聲功率100w，超聲溫度40℃，然后放置于超聲波清洗器中震蕩20min。震蕩結束后依次抽濾，再加入活性碳30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標號，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。，計算穿心蓮內酯的相對含量。⑸ 以反應溫度為單因素變量精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，再加入50mL 75%乙醇，設置超聲功率100瓦，溫度設置為450、560、65℃，置于超聲波清洗器中震蕩20min，震蕩結束后依次抽濾，再加入活性碳30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標號，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。，計算穿心蓮內酯的相對含量。 正交試驗在以上單因素試驗結果的基礎上，選擇對穿心蓮內酯提取濃度影響較大的各主要因素進行正交試驗。以反應溫度45℃時，對超聲震蕩時間、超聲功率、料液比、提取溶劑這4個因素進行3水平4因素L9(34)正交試驗，所得濾液用75%乙醇定容至250mL，在最大吸收波長226nm處測吸光度，找出穿心蓮內酯提取的最佳工藝條件。表32 正交試驗因子水平表因素Factors水平A超聲震蕩時間/minB超聲功率/wC料液比/mLD提取溶劑1401001:2075%乙醇2601201:25乙酸乙酯3801401:30石油醚 驗證實驗精確稱取5g穿心蓮粉3份，分別加入250mL錐形瓶，設置溫度為60℃，超聲功率140w，超聲震蕩60min，依次用真空抽濾，再加入活性炭，30℃水浴10min脫色，抽濾，將濾液標號并用75%乙醇定容至250mL。，計算穿心蓮內酯的相對含量。 穿心蓮內酯的鑒別⑴ 物理常數：~232℃。⑵ 薄層色譜：吸附劑：硅膠GCMC板展開劑：氯仿無水乙醇（20:1）顯色劑：碘蒸氣結果：穿心蓮內酯在常量下為一個斑點。⑶顯色反應：① 亞硝酰鐵氰化鈉堿液反應 取穿心蓮內酯結晶少許放在放在比色板上（白色具穴磁板）上，%亞硝酰鐵氰化鈉溶液2滴，10%氫氧化鈉溶液2滴。② 3,5 二硝基苯甲酸堿液反應（Kedde,s reagent） 取穿心蓮內酯結晶少許，于比色板上，加3,5二硝基苯甲酸溶液2滴，呈紫色。4 結果與討論 實驗結果 標準曲線繪制，、、于226nm測定吸光度值，繪制標準曲線。穿心蓮內酯與吸光度的回歸方程為Y=，R2=。見圖41。表41 不同濃度穿心蓮內酯標準液所得吸光度濃度（mg/ml)吸光值(Abs)圖41 穿心蓮內酯標準曲線圖 以超聲震蕩時間為單因素變量表42 不同超聲振蕩時間對穿心蓮內酯提取的影響時間（time）20min40min60min80min100min120min吸光值(Abs) 圖42 不同超聲振蕩時間對穿心蓮內酯提取的影響 由表格和圖片可知，超聲震蕩時間在60、80min時穿心蓮內酯提取濃度較高，在40min時達到最高。 以超聲功率為單因素變量表43 不同超聲功率對穿心蓮內酯提取的影響超聲功率