臨床免疫定性實驗的質(zhì)量保證(編輯修改稿)
2025-06-22 01:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 溫育 ? 常采用的溫育溫度有 43℃ 、 37℃ 、室溫等。 ? 溫育所需時間與溫度成反比，即溫育溫度高，則所需時間相對較短。 ? 溫育時，微孔板應(yīng)置于水?。ǜ∮谒妫┗驖窈兄?，以使反應(yīng)溶液的溫度迅速與室溫平衡。 ? “邊緣效應(yīng)”的排除 : 使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板 孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度 。 洗板 ? 洗滌是 ELISA測定過程中決定實驗成敗的關(guān)鍵步驟 。 ? 洗板液一般為含 % Tween20 的中性 PBS 。 ? 手工洗板要避免氣泡殘留孔內(nèi)，洗板機洗板時，將洗液完全吸凈，否則空白值將升高甚至出現(xiàn)“花板”現(xiàn)象 。 ? 機洗的次數(shù)要通過多次實驗來確定。 顯色 ? 加入底物 A 和 B 后，應(yīng)振蕩混勻 ? 當(dāng)?shù)孜餅? OPD(鄰苯二胺） 時，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行；底物為 TMB（四甲基聯(lián)苯胺）時，要新鮮配制。 ? 顯色時間：建議在 37℃ 下反應(yīng) 15～ 30分鐘后，終止反應(yīng)比色測定。 比色 ? 加酸終止顯色反應(yīng)后，比色測定前應(yīng)振蕩混勻 ? 測定時，要注意酶標(biāo)儀的波長是否已調(diào)至合適 ? 最好選擇 雙波長 比色測定，雙波長測定能去除背景的干擾，注意避免出現(xiàn)吸光度值為負(fù)值的現(xiàn)象 。 灰區(qū)的概念 ? ELISA“ 灰區(qū)”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。即將 CO值上下一段區(qū)域定為陽性可疑。處于“灰區(qū)”的樣本，可通過確認(rèn)試驗或重復(fù)檢測來確定到底是陽性還是陰性 。如果重復(fù)檢測仍然落在“灰區(qū)”，則結(jié)果可報“陽性”。 灰區(qū)的設(shè)置 ? 灰區(qū) ” 的設(shè)置有二種方式：⑴ CO（ 1177。 CV）， CV為該試劑的批內(nèi) CV (一般在 1520%)；⑵CO177。 2s， s為實驗室做室內(nèi)質(zhì)控 RCV常規(guī)條件下的變異）的標(biāo)準(zhǔn)差。 結(jié)果判斷與報告 ? 按照試劑盒確定的 Cutoff 值判斷結(jié)果 。 ? 對于 “ 灰區(qū) ” 的問題，報告方式引入 “ 可疑 ” 較為合理，同時對結(jié)果做必要的說明。 ? 各試劑盒 CO值差異及變異系數(shù)大等因素，結(jié)果缺乏可比性，位報告結(jié)果的不一致對于臨床實驗室來說是不可回避，也是目前醫(yī)療糾紛主要集中點和“ 結(jié)果互認(rèn) ” 的最
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