【文章內(nèi)容簡介】 注意事項 ? 、腹部收縮試驗?？蓱?yīng)用多種動物，以小鼠和大鼠最佳。 ? 。但應(yīng)用最普遍的是醋酸溶液 ? 3. Schmauss? 7? 提出了一個行為學(xué)評分標準，將扭體行為分為 0～ 3四個等級 ,根據(jù)這個評分標準可以把行為學(xué)量化。因此，這種模型也成為評定其它模型的一個對照標準。 ? (4 %)、大鼠扭體(6 %)反應(yīng) , 應(yīng)注意。 ? ，亦用大鼠（費用高） 小鼠扭體反應(yīng)誘發(fā)劑種類 誘發(fā)劑名稱 濃度 (%) 用量 (ml/只 ) 醋酸溶液 ～ (小鼠 ) ～ (大鼠 ) 酒石酸銻鉀溶液 苯醌水溶液 (飽和溶液 ) 緩激肽溶液 2苯 1,4苯甲酰苯醌 (含有 5 %酒精水溶液 ) %苯醌混懸于 1%羧甲基纖維素溶液 PgE1 烏頭堿、乙酰膽堿、高嶺土混懸液、酵母多糖溶液、五羥色胺、硫酸鎂等。 ? 5. 醋酸濃度為 1． 1％時小鼠扭體最明顯，注射后3— 5分鐘小鼠出現(xiàn)明顯的扭體反應(yīng)。酸濃度為0． 3％，不出現(xiàn)扭體反應(yīng)，醋酸濃度為 1． 9％時，小鼠活動減少。室溫在 20～ 22℃ 扭體反應(yīng)最典型 , l6℃ 時小鼠扭體反應(yīng)不穩(wěn)定， 28℃ 時小鼠活動減少 ? 8? 。 ? 。 ? , 放久效用減弱。 ? , 一般在控制在 25～30次為宜。 【 評價 】 ? 是篩選鎮(zhèn)痛藥的 常用方法之一 ,尢其是弱鎮(zhèn)痛藥的一種常規(guī)篩選試驗方法。適合于中樞和外周鎮(zhèn)痛藥的篩選研究 , 尤其用于外周鎮(zhèn)痛藥的評價。其試驗的作用強度和臨床鎮(zhèn)痛效果具有明顯的相關(guān)性。 ? , 以出現(xiàn)扭體鼠為陽性 , 不出現(xiàn)扭體鼠為陰性 , 計算其ED50, 評價藥效作用強度。所反應(yīng)藥效作用前者強 ,后者弱。 ? 、敏感、方便、重復(fù)性好、經(jīng)濟實惠的實驗方法。 ? 4..扭體反應(yīng)代表內(nèi)臟痛 (緊張性病理性疼痛 ), 亦是應(yīng)用最為廣泛的內(nèi)臟痛模型之一。無刺激特異性。方法缺乏特異性 , 一些非鎮(zhèn)痛藥 ,如中樞抑制劑、阿托品、利多卡因等有抑制扭體反應(yīng) ,出現(xiàn)假陽性 (應(yīng)結(jié)合其他測痛方法 ), 約有 8％的動物不出現(xiàn)扭體反應(yīng)，而且不能在同一個動物上觀察藥物的時效作用。 家兔 K 離子皮下透入致痛實驗 (K+ pain test) ? 【 原理 】 正常情況下，細胞膜內(nèi)外 K+濃度相差極大。局部組織受損時，組織釋放的 K+ 為一種致痛物質(zhì)。當 K+濃達到 10～ 15mmol/L時即可致痛。 ? 由于輸入電流強度與 K＋ 透入及其引起的疼痛反應(yīng)呈正比，給藥后電流強度的變化直接反映受試藥物鎮(zhèn)痛作用強弱。當在一定強度直流電場作用下，飽和氯化鉀溶液可以經(jīng)不同部位皮膚透入動物體內(nèi)產(chǎn)生傷害性刺激，引起動物疼痛反應(yīng)，以家兔縮腿，搖頭，掙扎、揚爪等反應(yīng)作為痛閾指標 , 觀察受試藥物對家兔痛閾的影響。當給藥后 ,家兔上述反應(yīng)消失或減弱。表明受試藥具有鎮(zhèn)痛效應(yīng)。 方法 ? 選用體重 ～ ，雌雄不拘 ? 家兔臵于固定器中 。 除去左耳尖部位毛 。 將浸泡飽和氯化鉀溶液的棉球臵于耳尖部 ， 把 K＋ 4型測痛儀 的刺激電極臵于棉球上并固定好 ， 保持濕潤狀態(tài) 。 無關(guān)電極為針狀電極 ， 插入后腿 ， 并用生理鹽水濕潤紗布蓋上 。 以引起家兔搖頭或全身掙扎反應(yīng)作為疼痛反應(yīng)指標 ， 記錄從通電開始至引起家兔痛反應(yīng)的電流強度 （ mA數(shù) ） 作為痛閾值 。 給藥前測定痛閾二次 ， 取其 mA數(shù)均值作為基礎(chǔ)痛閾值 。 給藥后 60分測痛 ， 每 10分鐘測痛一次 ，觀察 2小時 , 計算給藥后痛閾值提高百分率 ， 與對照比較, 檢驗組間電流強度顯著性差異 。 必要時可測定其 ED50值 。 ? 大鼠法 : 測痛儀的輸出電極 (正極 )于尾部下 1／ 3處用乳膠管固定 ,無關(guān)電極用鹽水紗布固定于尾根部，以甩尾 (嘶叫、全身掙扎等 )反應(yīng)作為疼痛反應(yīng)指標 ,記錄甩尾的電流強度 (mA)作為嘶叫和運動痛閾，并計算出鎮(zhèn)痛指數(shù)。 ? 由于閾電流增加反映鎮(zhèn)痛藥效應(yīng)強度和有效時程 ,與對照組比較 ,閾電流增長 2倍以上可認為藥有鎮(zhèn)痛作用 ,或計算其 ED50值。若痛閾測定用固定電流強度 , 記錄動物痛反應(yīng)時間作為痛閾值 , 計算 PMAP,以給藥后痛閾值超過基礎(chǔ)痛閾一倍為 100%鎮(zhèn)痛。 ? 猴實驗 ? 以縮腿、掙扎為疼痛反應(yīng)指標 ? 價昂貴 ,不宜用于藥物篩選 【 評價 】 ? 本方法采用 K+4型測痛儀測痛 , 輸入電流強度與 K＋透入及其引起的痛反應(yīng)呈正比 ,閾電流增減反映藥物鎮(zhèn)痛作用強弱 ,并可以同時觀察其作用時程。操作方便，靈活、反應(yīng)指標明確 , 直觀記錄，能準確測定痛閾值 , 結(jié)果重現(xiàn)性好 , 為常用測痛方法之一。廣泛用于研究鎮(zhèn)痛藥的效價強度和作用時程。 ? 為了進一步了解藥物作用方式并找到更適于人的治療量 ,在一種新化合物試用于臨床前還需要用猴進行實驗。 【 注意事項 】 ? 1. 實驗必須在 12hL/12hD光周期的恒溫 (22～26oC)、恒濕、安靜的光控實驗室進行 , 實驗前 7天將動物臵于光控室飼養(yǎng)。 ? 2. 每次實驗必須在同一時間進行。 ? 3. 安放電極耳尖部位必須脫毛 ,電極必須固定牢，并經(jīng)常用生理鹽水保持濕潤狀態(tài)。 ? 4. 輸入電壓必須穩(wěn)定。 ? 5. 為了避免損傷，規(guī)定最強的電流為 1． 0mA為限。 小鼠光輻射熱甩尾法 (tailflick test) ? 【 原理 】 小鼠光輻射熱甩尾法也叫光熱甩尾或光照甩尾。是將一束光照射到動物尾根 1/3處 ,使鼠尾局部升溫 ,產(chǎn)生熱刺激 ,當其尾部受到傷害性刺激超過動物忍耐的痛閾時 ,動物出現(xiàn)明顯甩尾的躲避反應(yīng) , 是一種脊髓的屈曲反射。 ? 光輻射熱甩尾是急性傷害性知覺疼痛的測痛方法 , 反應(yīng)體表痛 , 疼痛持續(xù)的時間長短不。 ? 以動物甩尾作為痛反應(yīng)指標 ,記錄動物自光照射開始到甩尾反應(yīng)的時間 (潛伏期 )作為疼痛閾值。根據(jù)動物痛閾值高低變化來判斷藥物的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。 方法 ? 小鼠 ,雌雄兼用 , 體重 1822g。實驗前 12小時禁食 ,不禁水。 ? 把小鼠裝入小鼠固定筒內(nèi)。尾部暴露于外，實驗前先用 75%乙醇檫凈鼠尾，用黑墨汁涂于尾根部下 1/3處作為光刺激點的標記。測痛時，使小鼠尾光刺激點與 YLS12A鼠尾光照測痛儀聚光燈燈孔重合 ,待動物安靜后進行測痛，以鼠尾受熱刺激出現(xiàn)甩尾作為疼痛反應(yīng)指標。記錄小鼠從開始光照射到甩尾反應(yīng)的潛伏期（ TFL, s）作為痛閾值。預(yù)選基礎(chǔ)痛閾 5～ 7秒小鼠供實驗用。 ? 取合格小鼠隨機分為對照組、 OT05B組 (26181。g、18181。g/kg)、嗎啡組 (陽性藥組 ,5 mg/kg))。每組10只。各組給藥前連續(xù)測痛 2次，取其均值作為給藥前基礎(chǔ)痛閾值。 ? 各組肌肉注射給藥后 45分測痛 , 計算其均值及痛閾提高百分率 , 痛閾提高率 %。 ? 給藥后 TFL一基礎(chǔ) TFL ? 痛閾提高率 % = X 100 % ? 基礎(chǔ) TFL ? ,與對照組比較 , 檢驗其組間顯著性差異。 .對小鼠輻射熱甩尾痛閾值的影響 組 別 劑 量 (X/kg) 動物 數(shù) 藥前痛閾 值 (s) 藥后痛閾值 (s) 痛閾提高 % 對照 11 〒 〒 OT05B 18181。g 12 〒 〒 嗎啡 5mg 13 〒 〒 ** 對照 14 〒 〒 Te05B 26181。g 13 〒 〒 * 【 評價 】 ? 1. 熱刺激引起的疼痛與生長抑素有關(guān)。光輻射熱甩尾法試驗 , 是防御性的反射，主要在脊髓水平進行整合。是一種脊髓的屈曲反射 , 反應(yīng)體表痛?？梢詼y定輕度麻醉的動物而不受動物運動協(xié)調(diào)性的影響。在實驗觀察中 ,動物的跑反應(yīng)是大腦控制的復(fù)雜現(xiàn)象。甩尾法比熱板法具有優(yōu)越性。但必須引起注意 ,本法純粹是一種脊髓反射 ,骨骼肌松弛藥可能呈陽性結(jié)果。 ? ,但對弱鎮(zhèn)痛藥 ,如阿斯匹林則出現(xiàn)陰性結(jié)果。 ? 3. 光輻射熱甩尾法試驗 ,終點指標直觀、明確 ,記錄潛伏期準確。設(shè)備簡單、操作方便 ,故常用。 ? ，而不能對動物意識性或目的性的反應(yīng)進行客觀檢測。甩尾實驗最終的行為反應(yīng)也較為復(fù)雜（如舔其后爪）。 ? 、大鼠、 ,免或豚鼠。常用小鼠或大鼠 , 以甩尾潛伏期為痛反應(yīng)指標。小鼠易得 ,