【文章內(nèi)容簡介】 肪。因為提取物中除脂肪外，還含有色素、蠟、樹脂、游離脂肪酸等物質(zhì)。 三、儀器與試劑 ① 索氏抽提器 ② 電熱恒溫鼓風干燥箱 ① 無水乙醚或石油醚（沸程 30～ 60℃ ）； ② 石英砂 ：粒度 ～ ，二氧化硅的質(zhì)量分數(shù)不低于 99%。 ③ 濾紙筒 四、實驗步驟 1．濾紙筒的制備 將濾紙剪成長方形 815cm ，卷成圓筒，直徑為 6cm，將圓筒底部封好，最好放一些脫脂棉，避免向外漏樣。 2．索式抽提器的準備 索氏抽提器由三部分組成，回流冷凝管、提取筒、提脂瓶組成。提脂瓶在使用前需烘干并稱至恒重，其它要干燥。 3．精確稱取烘干磨細的樣品 2～ 5g（精確到 ） ，放入已稱重的濾紙筒（半固體或液體樣品取 5～ 10g（精確到 ） 于蒸發(fā)皿中，加 20g 海砂，在水浴上蒸干，再于 100177。 5℃ 烘干 ，研細，全部移入濾紙筒內(nèi)，蒸發(fā)皿及附有樣品的玻璃14 棒用蘸有乙醚的棉花擦凈，棉花也放入濾紙筒內(nèi)），封好上口。 4．抽提 將裝好樣的濾紙筒放入抽提筒，連接已恒重的脂肪燒瓶，從提取器冷凝管上端加入乙醚，加入的量為提取瓶體積的 2/3。 接上冷凝裝置，在恒溫水浴中抽提，水浴溫度大約為 55℃ 左右，一般樣品抽提 610 小時，堅果樣品提取約 16 小時。提取結(jié)束時可用濾紙檢驗，接取 1 滴抽提液，無油斑即表明提取完畢。 5．回收乙醚 取下脂肪瓶，回收乙醚。待燒瓶內(nèi)乙醚剩下 1～ 2 mL 時，在水浴上蒸干，再于 100150℃ 烘箱烘至恒重，記錄重量。 五 、結(jié)果計算 式中： m2——接受瓶和脂肪的質(zhì)量， g m1——接受瓶的質(zhì)量， g； m ——樣品的質(zhì)量， g。 六、注意事項與說明 1．索氏提取法適用于脂類含量較高，結(jié)合態(tài)的脂類含量較少，能烘干磨細，不宜吸濕結(jié)塊的樣品的測定。此法只能測定游離態(tài)脂肪，結(jié)合態(tài)脂肪需在一定條件下水解轉(zhuǎn)變成游離態(tài)的脂肪方能測出。 2．樣品含水分會影響溶劑提取效果，而且溶劑會吸收樣品中的水分造成非脂成分溶出。裝 樣品的濾紙筒要嚴密，不能往外漏樣品，也不要包得太緊影響溶劑滲透。放入濾紙筒時高度不要超過回流彎管，否則樣品中的脂肪不能提盡，造成誤差。 3．對含多量糖及糊精的樣品，要先以冷水使糖及糊精溶解，經(jīng)過濾除去，將殘渣連同濾紙一起烘干，再一起放入提提管中。 4．抽提用的乙醚或石油醚要求無水、無醇、無過氧化物，揮發(fā)殘渣含量低。 5．提取時水浴溫度不可過高，以每分鐘從冷凝管滴下 80 滴左右，每小時回流 6—12 次為宜，提取過程應注意防火。 6．抽提時，冷凝管上端最好連接一個氯化鈣干燥管。這樣， 可防止空氣中水分進入，也可避免乙醚揮發(fā)在空氣中，如無此裝置可塞一團干燥的脫脂棉球。 15 7．提取是否完全，可憑經(jīng)驗，也可用濾紙或毛玻璃檢查，由抽提管下口滴下的乙醚滴在濾紙或毛玻璃上，揮發(fā)后不留下油跡表明已抽提完全，若留下油跡說明抽提不完全。 8．在揮發(fā)乙醚或石油醚時，切忌用直接火加熱，應該用電熱套，電水浴等。烘前應驅(qū)除全部殘余的乙醚，因乙醚稍有殘留，放入烘箱時，有發(fā)生爆炸的危險。 9．反復加熱會因脂類氧化而增重。重量增加時，以增重前的重量作為恒重。 10．索氏提取法對大多數(shù)樣品結(jié)果比較可靠，但需 要周期長，溶劑量大。 16 還原糖的測定 （直接滴定法） 一、實驗目的 1．了解費林試劑熱滴定測定 還原糖 的原理。 2．能夠準確 測定果蔬中還原糖 的含量。 二、實驗原理 還原糖是指含有自由醛基或酮基的單糖和某些二糖。在堿性溶液中，還原糖將 Cu2+、 Hg2+、 Fe3+、 Ag+等金屬離子還原，而糖本身被氧化和降解。 費林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和亞甲基藍（氧化還原指示劑）；乙液含氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。將一定量的甲液和乙液等體積混合，生成可溶性的絡(luò)合物酒石酸鉀鈉銅；在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉淀，氧化亞銅沉淀再與試劑中的亞鐵氰化鉀反應生成可溶性無色化合物，便于觀察滴定終點。滴定時以亞甲基藍為氧化－還原指示劑。亞甲基藍氧化能力比二價銅弱，待二價銅離子全部被還原后，稍過量的還原糖可使藍色的氧化型亞甲基藍還原為無色的還原型亞甲基藍，即達滴定終點。根據(jù)消耗樣液量可計算出還原糖含量。 三、試劑 1．堿性酒石酸銅甲液：稱取 15g 硫酸銅 ()及 次甲基藍，溶于水中并稀釋到 1000ml。 2．堿性酒石酸銅乙液：稱取 50g 酒石酸 鉀鈉及 75g 氫氧化鈉，溶于水中，再加入 4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至 1000ml，貯存于橡皮塞玻璃瓶中。 3．乙酸鋅溶液：稱取 乙酸鋅，加 3ml 冰醋酸，加水溶解并稀釋到 100ml。 4． ％亞鐵氰化鉀溶液：稱 亞鐵氰化鉀溶于水并稀釋至 100ml。 5．葡萄糖標準溶液：準確稱取 經(jīng)過 98—100℃ 干燥至恒重的無水葡萄糖，加水溶解后加入 5ml 鹽酸 (防止微生物生長），移入 1000ml 容量瓶中，用水稀釋到 l000ml。 6. 1 mol/L NaOH 標準溶液。 7． 15%Na2CO3 溶液：稱 15g 碳酸鈉溶于水并稀釋至 100ml。 17 8． 10%Pb(Ac)2 溶液：稱 10g 醋酸鉛溶于水并稀釋至 100ml。 9． 10%Na2SO4 溶液：稱 10g 硫酸鈉溶于水并稀釋至 100ml。 四、試驗步驟 1．樣品處理 ① 含淀粉的食品：稱取粉碎或混勻后的試樣 10g～ 20g(精確至 )，置250mL 容量瓶中，加水 200mL，在 45℃ 水浴中加熱 1h，并時時振搖，冷卻后加水至刻度，混勻，靜置，沉淀。 吸取 上清液置于另一 250mL 容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液 5mL 和亞鐵氰化鉀溶液 5mL，加水至刻度，混勻，靜置 30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取后續(xù)濾液備用。 ② 酒精飲料：稱取混勻后的試樣 100g(精確至 )，置于蒸發(fā)皿中，用氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積的 1/4 后，移入 250mL 容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液 5mL 和亞鐵氰化鉀溶液 5mL，加水至刻度，混勻，靜置 30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取后續(xù)濾液備用。 ③ 碳酸飲料：稱取混勻后的試樣 100g(精確至 ) 于蒸發(fā)皿中，在水浴上微熱攪拌除去二氧化碳后，移入 250mL 容量瓶中，用水洗滌蒸發(fā)皿， 洗液并入容量瓶，加水至刻度，混勻后備用。 ④ 其他食品：稱取粉碎后的固體試樣 ～ 5g(精確至 )或混勻后的液體試樣 5g～ 25g(精確至 ) ，置 250mL 容量瓶中，加 50mL 水，緩慢加入乙酸鋅溶液 5mL 和亞鐵氰化鉀溶液 5mL，加水至刻度，混勻，靜置 30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取后續(xù)濾液備用。 2. 堿性酒石酸銅溶液的標定 吸取堿性酒石酸銅甲液 和堿性酒石酸銅乙液 ，于 150mL 錐形瓶中，加水 10mL，加入玻璃珠 2 ?！?4 粒，從滴定管中加葡萄糖約 9mL，控 制在 2min 中內(nèi)加熱至沸，趁熱以每 2 秒 1 滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖的總體積，同時平行操作 3 份，取其平均值，計算每 10mL(堿性酒石酸甲、乙液各 5mL)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量 (mg)。 3. 試樣溶液預測 吸取堿性酒石酸銅甲液 和堿性酒石酸銅乙液 于 150mL 錐形瓶中，加水 10mL，加入玻璃珠 2 ?！?4 粒，控制在 2min 內(nèi)加熱至沸，保持沸18 騰以先快后慢的速度，從滴定管中滴加試樣溶液，并保持沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以 1 滴 /2s 的速度滴定，直至溶 液藍色剛好褪去為終點，記錄樣品溶液消耗體積。 4. 試樣溶液測定 吸取堿性酒石酸銅甲液 和堿性酒石酸銅乙液 ，置于 150mL錐形瓶中，加水 10mL，加入玻璃珠 2 ?！?4 粒，從滴定管滴加比預測體積少1mL 的試樣溶液至錐形瓶中，控制在 2min 內(nèi)加熱至沸，保持沸騰繼續(xù)以 1 滴/2s 的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積 (V)。 五、結(jié)果計算 式中： X — 試樣中還原糖的含量 (以某種還原糖計 )，單位為克每百克 (g/100g)； m1 — 堿性酒石酸銅 溶液 (甲、乙液各半 )相當于某種還原糖的質(zhì)量，單位為毫克(mg)； m — 試樣質(zhì)量，單位為克 (g)； F — 系數(shù)，對 、 、 為 1； 為 ； V — 測定時平均消耗試樣溶液體積，單位為毫升 (mL) ； 250 — 定容體積，單位毫升 (mL)； 六、注意事項 1．費林試劑甲液和乙液應分別貯存，用時才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。 2．滴定必須是在沸騰條件下進行，保持反應液沸騰可防止空氣進入，也可加快還原糖與 Cu2＋ 的 反應速度； 3．滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進入反應溶液中。 19 總糖的測定 一、實驗目的 掌握直接滴定法測定總糖的原理和方法。 二、實驗原理 樣品經(jīng)處理除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)后，加入鹽酸，在加熱條件下使蔗糖水解為還原性單糖，以直接滴定法測定水解后樣品中的還原糖總量。 三、試劑 1． 6mo1/mL 鹽酸溶液 2． 甲基紅乙醇溶液：稱取 甲基紅，用 60%乙醇溶解并定容至 100ml。 3． 20%氫氧化鈉溶液。 4． %轉(zhuǎn)化糖標準溶液：稱取 10539。C 烘干至恒重的純蔗糖 ，用水溶解并移入 1000m1 容量瓶中，定容，混勻。取 50m1 于 100m1 容量瓶中，加 6mol/L鹽酸 5m1，在 68～ 70℃ 水浴中加熱 15min，取出于流動水下迅速冷卻，加甲基紅指示劑 2 滴，用 20%NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。此溶液每毫升含轉(zhuǎn)化糖 lmg。 5．費林氏 A 液：稱取 15g (CuS045H2O）及 次甲基藍，溶于水并稀釋到 1L。 6．費林氏 B 液：稱取 50g 酒石酸鉀鈉及 75g 氫氧化鈉，溶于水，再加入 4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至 1L， 貯存于橡皮塞玻璃瓶中。 7．乙酸鋅溶液：稱取 乙酸鋅（ Zn（ CH3COO） 22H2O），加 3m1 冰醋酸，加水溶解并稀釋至 1 00ml。 8． %亞鐵氰化鉀溶液：稱取 亞鐵氰化鉀 [K4Fe（ CN） 63H2O]，溶于水，稀釋至 100m1。 四、實驗步驟 取適量樣品，移入 250m1 容量瓶中，慢慢加入 5m1 乙酸鋅溶液和 5m1 亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，搖勻后靜置 30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，收20 集濾液備用。 吸取處理后的樣液 50mL 于 l00mL 容量瓶中，加入 5mL6mol/L 鹽酸溶液，置68～ 70℃ 水浴中加熱 15min，取出后迅速冷卻，加甲基紅指示劑 2 滴，用 20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。 準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各 5mL，置于 250mL 錐形瓶中，加水 l 0mL，玻璃珠 3 粒。從滴定管滴加約 9m1 轉(zhuǎn)化糖標準溶液，加熱使其在 2min 內(nèi)沸騰，準確沸騰 30s，趁熱以每 2 秒 1 滴的速度繼續(xù)滴加轉(zhuǎn)化糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點。記錄消耗轉(zhuǎn)化糖標準溶液的總體積。平行操作 3 次，取其平均值，按下式計算。 F＝ CV 式中： F— I0ml堿性酒石酸銅溶液相當于轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量， mg； C—轉(zhuǎn)化糖標準溶液的濃度， mg/ml； V—標定時消耗轉(zhuǎn)化糖標準溶液的總體積， ml。 3．樣品溶液預測 準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各 5m1，置于 250m1 錐形瓶中，加水 l0ml，玻璃珠 3 粒，加熱使其在 2min 內(nèi)沸騰，準確沸騰 30s，趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時要始終保持溶液呈沸騰狀態(tài)，待溶液蘭色變淺時，以每 2 秒 1 滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點。記錄樣品溶液消耗的體積。 4．樣品溶液測 定 準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各 5ml，置于 250m1 錐形瓶中，加水 l0ml，加玻璃珠 3 粒，從滴定管滴加入比預測時樣品溶液消耗總體積少 lml 的樣品溶液，加熱使其在 2min 內(nèi)沸騰，準確沸騰 30s，趁熱以每 2 秒 1 滴的速度繼續(xù)滴加樣液，直至藍色剛好褪去為終點。記錄消耗樣品溶液的總體積。同法平行操作 3 次，取平均值。 五、結(jié)果計算 1001 0 0 0100VV50mF%21????）＝總糖（以轉(zhuǎn)化糖計， 21 式中： F— I0ml堿性酒石酸銅溶液相當于轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量， mg； V1—樣品處理液總體積， ml； V2—