【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 肪。因?yàn)樘崛∥镏谐就猓€含有色素、蠟、樹脂、游離脂肪酸等物質(zhì)。 三、儀器與試劑 ① 索氏抽提器 ② 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 ① 無(wú)水乙醚或石油醚（沸程 30～ 60℃ ）； ② 石英砂 ：粒度 ～ ，二氧化硅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不低于 99%。 ③ 濾紙筒 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1．濾紙筒的制備 將濾紙剪成長(zhǎng)方形 815cm ，卷成圓筒，直徑為 6cm，將圓筒底部封好，最好放一些脫脂棉，避免向外漏樣。 2．索式抽提器的準(zhǔn)備 索氏抽提器由三部分組成，回流冷凝管、提取筒、提脂瓶組成。提脂瓶在使用前需烘干并稱至恒重，其它要干燥。 3．精確稱取烘干磨細(xì)的樣品 2～ 5g（精確到 ） ，放入已稱重的濾紙筒（半固體或液體樣品取 5～ 10g（精確到 ） 于蒸發(fā)皿中，加 20g 海砂，在水浴上蒸干，再于 100177。 5℃ 烘干 ，研細(xì)，全部移入濾紙筒內(nèi)，蒸發(fā)皿及附有樣品的玻璃14 棒用蘸有乙醚的棉花擦凈，棉花也放入濾紙筒內(nèi)），封好上口。 4．抽提 將裝好樣的濾紙筒放入抽提筒，連接已恒重的脂肪燒瓶，從提取器冷凝管上端加入乙醚，加入的量為提取瓶體積的 2/3。 接上冷凝裝置，在恒溫水浴中抽提，水浴溫度大約為 55℃ 左右，一般樣品抽提 610 小時(shí)，堅(jiān)果樣品提取約 16 小時(shí)。提取結(jié)束時(shí)可用濾紙檢驗(yàn)，接取 1 滴抽提液，無(wú)油斑即表明提取完畢。 5．回收乙醚 取下脂肪瓶，回收乙醚。待燒瓶?jī)?nèi)乙醚剩下 1～ 2 mL 時(shí)，在水浴上蒸干，再于 100150℃ 烘箱烘至恒重，記錄重量。 五 、結(jié)果計(jì)算 式中： m2——接受瓶和脂肪的質(zhì)量， g m1——接受瓶的質(zhì)量， g； m ——樣品的質(zhì)量， g。 六、注意事項(xiàng)與說(shuō)明 1．索氏提取法適用于脂類含量較高，結(jié)合態(tài)的脂類含量較少，能烘干磨細(xì)，不宜吸濕結(jié)塊的樣品的測(cè)定。此法只能測(cè)定游離態(tài)脂肪，結(jié)合態(tài)脂肪需在一定條件下水解轉(zhuǎn)變成游離態(tài)的脂肪方能測(cè)出。 2．樣品含水分會(huì)影響溶劑提取效果，而且溶劑會(huì)吸收樣品中的水分造成非脂成分溶出。裝 樣品的濾紙筒要嚴(yán)密，不能往外漏樣品，也不要包得太緊影響溶劑滲透。放入濾紙筒時(shí)高度不要超過(guò)回流彎管，否則樣品中的脂肪不能提盡，造成誤差。 3．對(duì)含多量糖及糊精的樣品，要先以冷水使糖及糊精溶解，經(jīng)過(guò)濾除去，將殘?jiān)B同濾紙一起烘干，再一起放入提提管中。 4．抽提用的乙醚或石油醚要求無(wú)水、無(wú)醇、無(wú)過(guò)氧化物，揮發(fā)殘?jiān)康汀? 5．提取時(shí)水浴溫度不可過(guò)高，以每分鐘從冷凝管滴下 80 滴左右，每小時(shí)回流 6—12 次為宜，提取過(guò)程應(yīng)注意防火。 6．抽提時(shí)，冷凝管上端最好連接一個(gè)氯化鈣干燥管。這樣， 可防止空氣中水分進(jìn)入，也可避免乙醚揮發(fā)在空氣中，如無(wú)此裝置可塞一團(tuán)干燥的脫脂棉球。 15 7．提取是否完全，可憑經(jīng)驗(yàn)，也可用濾紙或毛玻璃檢查，由抽提管下口滴下的乙醚滴在濾紙或毛玻璃上，揮發(fā)后不留下油跡表明已抽提完全，若留下油跡說(shuō)明抽提不完全。 8．在揮發(fā)乙醚或石油醚時(shí)，切忌用直接火加熱，應(yīng)該用電熱套，電水浴等。烘前應(yīng)驅(qū)除全部殘余的乙醚，因乙醚稍有殘留，放入烘箱時(shí)，有發(fā)生爆炸的危險(xiǎn)。 9．反復(fù)加熱會(huì)因脂類氧化而增重。重量增加時(shí)，以增重前的重量作為恒重。 10．索氏提取法對(duì)大多數(shù)樣品結(jié)果比較可靠，但需 要周期長(zhǎng)，溶劑量大。 16 還原糖的測(cè)定 （直接滴定法） 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1．了解費(fèi)林試劑熱滴定測(cè)定 還原糖 的原理。 2．能夠準(zhǔn)確 測(cè)定果蔬中還原糖 的含量。 二、實(shí)驗(yàn)原理 還原糖是指含有自由醛基或酮基的單糖和某些二糖。在堿性溶液中，還原糖將 Cu2+、 Hg2+、 Fe3+、 Ag+等金屬離子還原，而糖本身被氧化和降解。 費(fèi)林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和亞甲基藍(lán)（氧化還原指示劑）；乙液含氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。將一定量的甲液和乙液等體積混合，生成可溶性的絡(luò)合物酒石酸鉀鈉銅；在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，氧化亞銅沉淀再與試劑中的亞鐵氰化鉀反應(yīng)生成可溶性無(wú)色化合物，便于觀察滴定終點(diǎn)。滴定時(shí)以亞甲基藍(lán)為氧化－還原指示劑。亞甲基藍(lán)氧化能力比二價(jià)銅弱，待二價(jià)銅離子全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型亞甲基藍(lán)，即達(dá)滴定終點(diǎn)。根據(jù)消耗樣液量可計(jì)算出還原糖含量。 三、試劑 1．堿性酒石酸銅甲液：稱取 15g 硫酸銅 ()及 次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋到 1000ml。 2．堿性酒石酸銅乙液：稱取 50g 酒石酸 鉀鈉及 75g 氫氧化鈉，溶于水中，再加入 4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至 1000ml，貯存于橡皮塞玻璃瓶中。 3．乙酸鋅溶液：稱取 乙酸鋅，加 3ml 冰醋酸，加水溶解并稀釋到 100ml。 4． ％亞鐵氰化鉀溶液：稱 亞鐵氰化鉀溶于水并稀釋至 100ml。 5．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取 經(jīng)過(guò) 98—100℃ 干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖，加水溶解后加入 5ml 鹽酸 (防止微生物生長(zhǎng)），移入 1000ml 容量瓶中，用水稀釋到 l000ml。 6. 1 mol/L NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。 7． 15%Na2CO3 溶液：稱 15g 碳酸鈉溶于水并稀釋至 100ml。 17 8． 10%Pb(Ac)2 溶液：稱 10g 醋酸鉛溶于水并稀釋至 100ml。 9． 10%Na2SO4 溶液：稱 10g 硫酸鈉溶于水并稀釋至 100ml。 四、試驗(yàn)步驟 1．樣品處理 ① 含淀粉的食品：稱取粉碎或混勻后的試樣 10g～ 20g(精確至 )，置250mL 容量瓶中，加水 200mL，在 45℃ 水浴中加熱 1h，并時(shí)時(shí)振搖，冷卻后加水至刻度，混勻，靜置，沉淀。 吸取 上清液置于另一 250mL 容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液 5mL 和亞鐵氰化鉀溶液 5mL，加水至刻度，混勻，靜置 30min，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，取后續(xù)濾液備用。 ② 酒精飲料：稱取混勻后的試樣 100g(精確至 )，置于蒸發(fā)皿中，用氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積的 1/4 后，移入 250mL 容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液 5mL 和亞鐵氰化鉀溶液 5mL，加水至刻度，混勻，靜置 30min，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，取后續(xù)濾液備用。 ③ 碳酸飲料：稱取混勻后的試樣 100g(精確至 ) 于蒸發(fā)皿中，在水浴上微熱攪拌除去二氧化碳后，移入 250mL 容量瓶中，用水洗滌蒸發(fā)皿， 洗液并入容量瓶，加水至刻度，混勻后備用。 ④ 其他食品：稱取粉碎后的固體試樣 ～ 5g(精確至 )或混勻后的液體試樣 5g～ 25g(精確至 ) ，置 250mL 容量瓶中，加 50mL 水，緩慢加入乙酸鋅溶液 5mL 和亞鐵氰化鉀溶液 5mL，加水至刻度，混勻，靜置 30min，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，取后續(xù)濾液備用。 2. 堿性酒石酸銅溶液的標(biāo)定 吸取堿性酒石酸銅甲液 和堿性酒石酸銅乙液 ，于 150mL 錐形瓶中，加水 10mL，加入玻璃珠 2 ?！?4 粒，從滴定管中加葡萄糖約 9mL，控 制在 2min 中內(nèi)加熱至沸，趁熱以每 2 秒 1 滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖的總體積，同時(shí)平行操作 3 份，取其平均值，計(jì)算每 10mL(堿性酒石酸甲、乙液各 5mL)堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量 (mg)。 3. 試樣溶液預(yù)測(cè) 吸取堿性酒石酸銅甲液 和堿性酒石酸銅乙液 于 150mL 錐形瓶中，加水 10mL，加入玻璃珠 2 ?！?4 粒，控制在 2min 內(nèi)加熱至沸，保持沸18 騰以先快后慢的速度，從滴定管中滴加試樣溶液，并保持沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以 1 滴 /2s 的速度滴定，直至溶 液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣品溶液消耗體積。 4. 試樣溶液測(cè)定 吸取堿性酒石酸銅甲液 和堿性酒石酸銅乙液 ，置于 150mL錐形瓶中，加水 10mL，加入玻璃珠 2 ?！?4 粒，從滴定管滴加比預(yù)測(cè)體積少1mL 的試樣溶液至錐形瓶中，控制在 2min 內(nèi)加熱至沸，保持沸騰繼續(xù)以 1 滴/2s 的速度滴定，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積 (V)。 五、結(jié)果計(jì)算 式中： X — 試樣中還原糖的含量 (以某種還原糖計(jì) )，單位為克每百克 (g/100g)； m1 — 堿性酒石酸銅 溶液 (甲、乙液各半 )相當(dāng)于某種還原糖的質(zhì)量，單位為毫克(mg)； m — 試樣質(zhì)量，單位為克 (g)； F — 系數(shù)，對(duì) 、 、 為 1； 為 ； V — 測(cè)定時(shí)平均消耗試樣溶液體積，單位為毫升 (mL) ； 250 — 定容體積，單位毫升 (mL)； 六、注意事項(xiàng) 1．費(fèi)林試劑甲液和乙液應(yīng)分別貯存，用時(shí)才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物長(zhǎng)期在堿性條件下會(huì)慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。 2．滴定必須是在沸騰條件下進(jìn)行，保持反應(yīng)液沸騰可防止空氣進(jìn)入，也可加快還原糖與 Cu2＋ 的 反應(yīng)速度； 3．滴定時(shí)不能隨意搖動(dòng)錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來(lái)滴定，以防止空氣進(jìn)入反應(yīng)溶液中。 19 總糖的測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 掌握直接滴定法測(cè)定總糖的原理和方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理 樣品經(jīng)處理除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)后，加入鹽酸，在加熱條件下使蔗糖水解為還原性單糖，以直接滴定法測(cè)定水解后樣品中的還原糖總量。 三、試劑 1． 6mo1/mL 鹽酸溶液 2． 甲基紅乙醇溶液：稱取 甲基紅，用 60%乙醇溶解并定容至 100ml。 3． 20%氫氧化鈉溶液。 4． %轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取 10539。C 烘干至恒重的純蔗糖 ，用水溶解并移入 1000m1 容量瓶中，定容，混勻。取 50m1 于 100m1 容量瓶中，加 6mol/L鹽酸 5m1，在 68～ 70℃ 水浴中加熱 15min，取出于流動(dòng)水下迅速冷卻，加甲基紅指示劑 2 滴，用 20%NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。此溶液每毫升含轉(zhuǎn)化糖 lmg。 5．費(fèi)林氏 A 液：稱取 15g (CuS045H2O）及 次甲基藍(lán)，溶于水并稀釋到 1L。 6．費(fèi)林氏 B 液：稱取 50g 酒石酸鉀鈉及 75g 氫氧化鈉，溶于水，再加入 4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至 1L， 貯存于橡皮塞玻璃瓶中。 7．乙酸鋅溶液：稱取 乙酸鋅（ Zn（ CH3COO） 22H2O），加 3m1 冰醋酸，加水溶解并稀釋至 1 00ml。 8． %亞鐵氰化鉀溶液：稱取 亞鐵氰化鉀 [K4Fe（ CN） 63H2O]，溶于水，稀釋至 100m1。 四、實(shí)驗(yàn)步驟 取適量樣品，移入 250m1 容量瓶中，慢慢加入 5m1 乙酸鋅溶液和 5m1 亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，搖勻后靜置 30min，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，收20 集濾液備用。 吸取處理后的樣液 50mL 于 l00mL 容量瓶中，加入 5mL6mol/L 鹽酸溶液，置68～ 70℃ 水浴中加熱 15min，取出后迅速冷卻，加甲基紅指示劑 2 滴，用 20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。 準(zhǔn)確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各 5mL，置于 250mL 錐形瓶中，加水 l 0mL，玻璃珠 3 粒。從滴定管滴加約 9m1 轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱使其在 2min 內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰 30s，趁熱以每 2 秒 1 滴的速度繼續(xù)滴加轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積。平行操作 3 次，取其平均值，按下式計(jì)算。 F＝ CV 式中： F— I0ml堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量， mg； C—轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度， mg/ml； V—標(biāo)定時(shí)消耗轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積， ml。 3．樣品溶液預(yù)測(cè) 準(zhǔn)確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各 5m1，置于 250m1 錐形瓶中，加水 l0ml，玻璃珠 3 粒，加熱使其在 2min 內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰 30s，趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時(shí)要始終保持溶液呈沸騰狀態(tài)，待溶液蘭色變淺時(shí)，以每 2 秒 1 滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄樣品溶液消耗的體積。 4．樣品溶液測(cè) 定 準(zhǔn)確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各 5ml，置于 250m1 錐形瓶中，加水 l0ml，加玻璃珠 3 粒，從滴定管滴加入比預(yù)測(cè)時(shí)樣品溶液消耗總體積少 lml 的樣品溶液，加熱使其在 2min 內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰 30s，趁熱以每 2 秒 1 滴的速度繼續(xù)滴加樣液，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗樣品溶液的總體積。同法平行操作 3 次，取平均值。 五、結(jié)果計(jì)算 1001 0 0 0100VV50mF%21????）＝總糖（以轉(zhuǎn)化糖計(jì)， 21 式中： F— I0ml堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量， mg； V1—樣品處理液總體積， ml； V2—