【文章內(nèi)容簡介】 。 加樣后，陽性標(biāo)本可在 1~30 分鐘內(nèi)檢出。 30 分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。 （三） 試驗結(jié)果 陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條 17 帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。 陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。 失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶。 【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法 【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿樣本中的 HIV 抗體。當(dāng)待檢樣本中存在 HIV 抗體時，在反應(yīng)過程中形成“固相 HIV 抗原－ HIV 抗體－酶標(biāo)記 HIV 抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)。 【 HIV 篩查試驗操作程序】 （一） 試驗前準(zhǔn)備： 1. 試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（ 18~25℃ ）半小時 ，編號。 2. 換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。 3. 緩沖液配制：用蒸餾水 1： 19 倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在 37℃ 直至溶解。 （二）試驗操作 50ul待測樣品及陰、陽性對照血清。 ，置 37℃ 溫育 30min. 5 次（每次應(yīng)保持 30~60 秒浸泡時間），扣干。 100ul。 ，置 37℃ 溫育 30min。 5 次（每次應(yīng)保持 30~60 秒浸泡時間），扣干。 A、 B 各 50ul，輕拍混勻，覆上封板膜，置 37℃ 暗置 20min。 50ul。 。 （三）試驗結(jié)果 以上且陰性對照值小于 方可認(rèn)為本實(shí)驗有效。 value=+陰性對照均值（若陰性對照小于 以 計） OD值大于或等于臨界值為初篩陽性，小于臨界值為陰性。 18 第三章 結(jié)果報 告與注意事項 【復(fù)檢試驗】 對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告 HIV 抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗室進(jìn)行確認(rèn)。（具體詳見流程圖） 【篩試驗結(jié)果的報告】 對 HIV 抗體篩查試驗，呈陰性反應(yīng)者可出具 “HIV抗體陰性 ”報告。 對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具 “HIV抗體待復(fù)查 ”報告。 【初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送】 如需送上級實(shí)驗室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫 “HIV 抗體復(fù)測送檢單 ”，經(jīng) 1名檢驗人員和 1 名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實(shí)驗室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗室，或在本實(shí)驗室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實(shí)驗室。 【操作臺消毒處理】 用 3~5%84 消毒液擦拭臺面，如工作臺被溢出物污染，則用消毒液浸泡 30分鐘后，再行擦拭。 【房間消毒】 每日用紫外線照射 30~60min 【方法學(xué)特性及注意事項】 a) 試劑盒 4~30℃ 干燥保存。有效期 16 個月。 b) 抗凝全血應(yīng)采用 EDTA，樣品應(yīng)避免溶血。 c) 樣品應(yīng)在收集后 7 天內(nèi)檢測， 2~8℃ 保存，如果大于 7 天，應(yīng)冷凍保存。 d) 測試 卡僅用于 HIV 抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用 ELISA 方法進(jìn) 19 一步確認(rèn)。 e) 樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準(zhǔn)確加入。 f) 實(shí)驗環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)， 18~25℃ 進(jìn)行。 g) 本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險樣品處理。 【血清加樣表】見附件。 每次檢測完畢需填寫血清加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。 20 第三部分 設(shè)備 SOP 文件 一、 北京普朗 自動酶標(biāo)儀 DNM9602 1． 儀器簡介 RT2100C 是一臺網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病 、內(nèi)分泌障礙測定等診斷領(lǐng)域。 2． 儀器原理 3． 環(huán)境要求： 1) 避免陽光直曬 2) 溫度： 10℃ ~40℃，濕度 20%~85% 3) 電源必須接地良好 4) 電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源 4． 操作步驟 4． 1 開機(jī) 打開儀器背面的電源開關(guān)，等待約 10 秒鐘，開機(jī)初始化流程要完成以下工作： 1) 系統(tǒng)程序加載 2) 系統(tǒng)自檢 3) 讀取用戶數(shù)據(jù) 4) 前端初始化 5) 等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約 1 分鐘左右。 6) 光路自檢：期間濾光片輪會轉(zhuǎn)動，酶標(biāo)板將往返走板一次。 開機(jī)結(jié)束后，進(jìn)行主菜單窗口。 光學(xué)及比色系統(tǒng) 信號放大 A/D轉(zhuǎn)換 計算機(jī) LCD 顯示屏 觸摸屏 打印機(jī) 21 4． 2 項目設(shè) 置 在主菜單中按 [項目設(shè)置 ]鍵，進(jìn)入項目列表窗口。 4． 2． 1 新建與更改項目 按 [新建 ]或 [更改 ]鍵，添加或更改項目，如果項目數(shù)已經(jīng)超過 100，將無法創(chuàng)建新項目。按圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。 1) 項目名稱：該項必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項目名重復(fù)。 2) 試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。 3) 波長：從列表中選取，注意主波長和次波長不能重復(fù)。 4) 計算方法：從列表中選取 5) 雙樣本：若選擇雙樣本，則布板時每個樣本孔的相鄰孔自動設(shè)置為重復(fù)孔，計算時取兩者吸光度的平均值。 6) 空白上限：職由試劑要求空白必須不超過 ,則空白應(yīng)設(shè) 為 ，測試時如果空白孔吸光度值超過設(shè)定的上限，系統(tǒng)會提示用戶“空白也吸光度值過高”。 7) 定量計算，根據(jù)試劑說明輸入： a) 標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量：選擇 2~8 個標(biāo)準(zhǔn)品。 b) 濃度單位：從列表中選擇。 c) 雙標(biāo)準(zhǔn)：若選擇雙標(biāo)準(zhǔn)：則布板時每個標(biāo)準(zhǔn)孔的相鄰孔被自動設(shè)置為重復(fù)孔，計算時取兩者吸光度的平均值。 d) 標(biāo)準(zhǔn)品吸光度：雙擊標(biāo)準(zhǔn)品濃度列表項，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標(biāo)準(zhǔn)品濃度順序必須為由小到大。 8）計算，按試劑說明在窗口中輸入： a) Cutoff 公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如 S/N，（ NS） /N 等均可轉(zhuǎn)換為 S/（ X*N+Y*P+Fac）的形式。 b) 陰性對照和陽性對照的吸光度范圍：對照的吸光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下限計算。例如有試劑要求陰性對照小于 0。 05 按 0。 05 計，則陰性對照下限應(yīng)設(shè)為 0。 05。 c) 對照：可以任意設(shè)置對照，但對照的數(shù)量不超過 5 個，計算時取所有對照吸光度的平均值。 9）陰陽性判定設(shè)置窗口 在此窗口中輸入判定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cutoff 方式 下，臨界值為樣本與 Cutoff 值的比值，定量計算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為 3 類： a) 正向閾值模 式：陰性＜陰性臨界值，陽性≥陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間內(nèi)的樣本判定為可疑。 b) 反向閾值模式：陰性＞陰性臨界值，陽性≤陽性臨界值。 c) 不需要判定陰陽性：在定性方式 中選擇“無。 所有參數(shù)設(shè)置完畢，按 [完成 ]鍵。 4． 3 樣品測試 在主菜單中按 [樣品測試 ]鍵，進(jìn)入如下窗口： a) 布板方向：橫向或縱向 b) 進(jìn)板方式：選擇連續(xù)方式（＜ 5 秒）提高測量速度，選擇步進(jìn)方式（＜ 15 秒）獲得更高的測量精度。 c) 振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速 3 檔，振板時間 1~60 秒，也可以選擇不振板。 22 設(shè)定完以上參數(shù)后，按 [確定 ]鍵，進(jìn)入布 板窗口。 4． 4 布板 4． 4． 1 樣本 任意點(diǎn)擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號從 1 起自動遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號，可再次點(diǎn)擊該孔位。 4． 4． 2 空白 空白孔在項目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項目測試的要求，可以選擇是否設(shè)定空白。 舊空白的保存和使用：空白孔的測試結(jié)果將自動保存，如果在同一項目的后續(xù)測試中不重新設(shè)定空白，則系統(tǒng)自動用舊空白進(jìn)行計算。 第個項目只允許設(shè)置一個空白孔，如果在設(shè)置空白孔時多次點(diǎn)擊不同的孔位，那么只有最后一次點(diǎn)擊的孔位被設(shè)定為空白孔 ，前面設(shè)置的空白孔被自動清除。 4． 4． 3 依次設(shè)置陰性對照和陽性對照。 按 [開始 ]鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無誤后，開始走板測試。走板結(jié)束，系統(tǒng)自動進(jìn)入吸光度顯示。 4． 5 關(guān)機(jī) 在主菜單中按 [關(guān)機(jī) ]，系統(tǒng)顯示關(guān)機(jī)確認(rèn)窗口，按 [YES]執(zhí)行關(guān)機(jī)程序，按 [NO]返回主菜單。 5． 儀器維護(hù) 1) 保持儀器工作環(huán)境的清潔。 2) 儀器表面的清潔，可以用中性清潔劑和濕布擦拭。 3) 液晶顯示器請用柔軟的布清潔 4) 勿讓任何溶劑，油脂類，腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。 二、 DG3080 自動 洗板機(jī) 1 目的 規(guī)范洗板機(jī)的操作程序，保證洗板機(jī)的正常狀態(tài)。 2 適用范圍 本實(shí)驗室 DNM9602 洗板機(jī)的操作。 3 操作人員 本實(shí)驗室實(shí)驗人員。 4 操作步驟 拔掉廢液瓶口的塞子（接有與洗板機(jī)相連的廢液管），倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰緊，以保證廢液管的通暢。 擰開洗液瓶的蓋子（接有與洗板機(jī)相連的洗液管），倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰緊，以保證洗液管 的通暢。 保證待洗反應(yīng)板所有的孔處于同一水平位置，以免孔邊緣過高碰到洗板機(jī)的吸液針。 開機(jī) 插上電源，打開電源開關(guān)（按后面板【 POWER】鍵），儀器顯示 “儀器復(fù)位中，請稍候 ”儀器 23 初始化結(jié)束后。儀器顯示： “就緒，當(dāng)前程序 X 請選擇功能鍵 ”X 處顯示的數(shù)字（范圍 0~15之間）表示當(dāng)前準(zhǔn)備就緒的是第幾號程序。此時儀器正處于待機(jī)狀態(tài)，用戶可進(jìn)行下一步操作。 預(yù)洗 在待機(jī)狀態(tài)下，使預(yù)洗槽處于清洗頭下方，按下【預(yù)洗 /返回】鍵，清洗頭抬起，電磁閥打開，洗液進(jìn)入預(yù)洗槽。清洗頭將對預(yù)洗槽洗滌 3 次，清洗容量為 400UL，但清洗時沒有暫停和浸泡步驟。 編程 按下【編程】鍵。進(jìn)入編程菜 單界面。畫面最左邊有閃動的指示光標(biāo) “→”，按下【 ↑】鍵或【 ↓】鍵移動所需要設(shè)定的參數(shù)前，按下【確定】鍵，即選中了該參數(shù)項，再按下【 ↑】或【 ↓】鍵設(shè)定該參數(shù)的參數(shù)值。 運(yùn)行 按下【運(yùn)行】鍵，系統(tǒng)將立即按照用戶設(shè)定的程序執(zhí)行。 關(guān)機(jī) 日常關(guān)機(jī) 最后一次洗板結(jié)束后，將電源開關(guān)置于【 OFF】位；并將酶標(biāo)板托盤上的預(yù)洗槽用蒸餾水裝滿，使清洗頭浸入預(yù)洗槽。 長期關(guān)機(jī) 將長時間不使用洗板機(jī)時，先用蒸餾水沖洗一遍整個系統(tǒng)，再進(jìn)行日常關(guān)機(jī)；并且傾倒、清洗廢液瓶，保持液體 干燥，以免清洗液中的緩沖鹽類結(jié)晶而堵塞清洗頭。 5 鍵盤功能 【編程】：進(jìn)入編程菜單。用來設(shè)定儀器的運(yùn)行方式及各項參數(shù)。 【運(yùn)行】：執(zhí)行先定的程序。 【 ↑】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來順次遞增程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo) “→”上移。 【 ↓】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來順次遞減程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo) “→”下移。 【復(fù)位】：終止當(dāng)前操作，使儀器恢復(fù)到開機(jī)狀態(tài)。 【預(yù)洗 /返回】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來使儀器執(zhí)行預(yù)洗程序；處于編程狀態(tài)時，此鍵可使顯示面板界面 回到待機(jī)狀態(tài) 【確定】：確認(rèn)光標(biāo)所指示的參數(shù)項。 6 編制洗滌程序 編程菜單中包括清洗方式、清洗頭數(shù)、清洗條數(shù)、清洗容量、加洗次數(shù)、清洗次數(shù)、暫停時間、浸泡時間 8 種參數(shù)項目。 清洗方式，條洗和板洗。 清洗頭數(shù)，可設(shè)定為 12 頭或 8 頭。 清洗條數(shù)，或設(shè)定在 1~12 范圍內(nèi)，該參數(shù)設(shè)置與清洗頭數(shù)有關(guān)，當(dāng)頭數(shù)為 12 時條數(shù)最大值為 8。反之當(dāng)頭數(shù)為 8 時，條數(shù)最大值為 12。 清洗容量，可在 50UL、 100UL、 150UL、 200UL、 250UL、 300UL、 350UL、 400UL、450UL 中選擇設(shè)定。 加洗次數(shù)，加洗次數(shù)可在 1~3 范圍內(nèi)設(shè)定。 清洗次數(shù)，清洗次數(shù)可在 1~10 范圍內(nèi)設(shè)定。 暫停時間，當(dāng)清洗方式為知洗時，清洗頭在注滿酶標(biāo)板每行后啟動暫停，時間可在 0~10秒內(nèi)任意設(shè)定，增量為 1 秒；當(dāng)清洗方式為板洗時，清洗頭在每次過板注滿水后啟動暫停，時間可在 0~60 秒任意設(shè)定，增量為 5 秒。 浸泡時間，一般清洗過程中，清洗頭在酶標(biāo)板最后一行中注滿水后，即啟動浸泡功能。浸泡時間可在 0~300 秒內(nèi)任意設(shè)定，增量為 30 秒，但在加洗程序中不能啟動浸 泡功能。 7 維護(hù)保養(yǎng)程序 24 平常不用時，拔掉電源插頭。 每天洗板機(jī)工作結(jié)束時，要對內(nèi)外其進(jìn)行清潔，用濕抹布擦洗洗板機(jī)的外壁及載物臺，以保證其潔凈。用蒸餾水將所有的管道清洗一遍，防止洗液的結(jié)晶堵塞管道。 及時倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機(jī)的故障。 保證待洗的反應(yīng)板的孔邊緣不要過高且水平，以免造