蛋白質(zhì)組學ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-30 06:01 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 phoresis， 2DE） 是將不同種類的蛋白質(zhì)以電荷差異和相對分子量差異為基礎進行的高分辨率分離分析方法。 工作原理： (1)1st dimension: 等電聚焦凝膠電泳 (IEF) 根據(jù)蛋白質(zhì)的凈電荷或等電點的不同進行分離 (2)2nd dimension: SDSPAGE 根據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量大小不同進行分離 雙向電泳后的凝膠經(jīng)染色后蛋白呈現(xiàn)二維分布圖： 水平方向 反映出蛋白在 pI上的差異， 垂直方向 反映出它們在分子量上的差別 。 第一向電泳：等電聚焦電泳 聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進行第二向電泳 第二向電泳：SDSPAGE 分子量大 分子量小 pH9 pH3 pH9 pH3 凝膠中加有兩性電解質(zhì)溶液（ pH93） 加電場后在凝膠內(nèi)形成一個穩(wěn)定pH梯度 加樣品，然后繼續(xù)電泳 凝膠染色表明樣品按照各自pI值沿著 pH梯度分布 (1)等電聚焦凝膠電泳（ IFE） 利用載體兩性電解質(zhì)在電場作用下沿電場方向在凝膠內(nèi)形成一個連續(xù)而穩(wěn)定的 pH梯度。 每種蛋白質(zhì)都將遷移至與它的 pI 相一致的pH處。 所用介質(zhì)為擁有 CH2=CHCONHR結構的 8種丙烯酰胺衍生物系列，其中 R為弱酸性或弱堿性基團，它們構成了分布在 pH39不同值的緩沖體系。 根據(jù)一定的配方計算后，將適宜的 IPG試劑添加至混合物中用于凝膠聚合，在聚合中 緩沖基團通過乙烯鍵共價聚合至聚丙烯酰胺骨架中而形成 pH梯度 。通過這種方式生成的 IPG不會發(fā)生電滲作用，因而可以進行特別穩(wěn)定的 IEF分離達到真正的平衡狀態(tài)。 固相 pH梯度等電聚焦（ IPGIEF） 等電聚焦凝膠電泳（ IFE） 上樣 去除膠條保護層、電泳 轉移膠條 固相等電聚焦電泳 垂直板電泳裝置 樣品遷移方向 (2)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 十二烷基硫酸鈉(SDS) 是一種去污劑，從而使蛋白質(zhì)獲得負電荷，屏蔽蛋白質(zhì)，因此電泳遷移率僅與分子大 小相關。 電泳過程中分子遷移的規(guī)律，小分子走在前頭，大分子滯后。 (2)SDS聚丙烯酰胺凝膠電
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