蛋白質(zhì)組學(xué)ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-30 06:01 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 phoresis， 2DE） 是將不同種類的蛋白質(zhì)以電荷差異和相對(duì)分子量差異為基礎(chǔ)進(jìn)行的高分辨率分離分析方法。 工作原理： (1)1st dimension: 等電聚焦凝膠電泳 (IEF) 根據(jù)蛋白質(zhì)的凈電荷或等電點(diǎn)的不同進(jìn)行分離 (2)2nd dimension: SDSPAGE 根據(jù)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量大小不同進(jìn)行分離 雙向電泳后的凝膠經(jīng)染色后蛋白呈現(xiàn)二維分布圖： 水平方向 反映出蛋白在 pI上的差異， 垂直方向 反映出它們?cè)诜肿恿可系牟顒e 。 第一向電泳：等電聚焦電泳 聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進(jìn)行第二向電泳 第二向電泳：SDSPAGE 分子量大 分子量小 pH9 pH3 pH9 pH3 凝膠中加有兩性電解質(zhì)溶液（ pH93） 加電場(chǎng)后在凝膠內(nèi)形成一個(gè)穩(wěn)定pH梯度 加樣品，然后繼續(xù)電泳 凝膠染色表明樣品按照各自pI值沿著 pH梯度分布 (1)等電聚焦凝膠電泳（ IFE） 利用載體兩性電解質(zhì)在電場(chǎng)作用下沿電場(chǎng)方向在凝膠內(nèi)形成一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的 pH梯度。 每種蛋白質(zhì)都將遷移至與它的 pI 相一致的pH處。 所用介質(zhì)為擁有 CH2=CHCONHR結(jié)構(gòu)的 8種丙烯酰胺衍生物系列，其中 R為弱酸性或弱堿性基團(tuán)，它們構(gòu)成了分布在 pH39不同值的緩沖體系。 根據(jù)一定的配方計(jì)算后，將適宜的 IPG試劑添加至混合物中用于凝膠聚合，在聚合中 緩沖基團(tuán)通過(guò)乙烯鍵共價(jià)聚合至聚丙烯酰胺骨架中而形成 pH梯度 。通過(guò)這種方式生成的 IPG不會(huì)發(fā)生電滲作用，因而可以進(jìn)行特別穩(wěn)定的 IEF分離達(dá)到真正的平衡狀態(tài)。 固相 pH梯度等電聚焦（ IPGIEF） 等電聚焦凝膠電泳（ IFE） 上樣 去除膠條保護(hù)層、電泳 轉(zhuǎn)移膠條 固相等電聚焦電泳 垂直板電泳裝置 樣品遷移方向 (2)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 十二烷基硫酸鈉(SDS) 是一種去污劑，從而使蛋白質(zhì)獲得負(fù)電荷，屏蔽蛋白質(zhì)，因此電泳遷移率僅與分子大 小相關(guān)。 電泳過(guò)程中分子遷移的規(guī)律，小分子走在前頭，大分子滯后。 (2)SDS聚丙烯酰胺凝膠電
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