細(xì)菌內(nèi)毒素檢查ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 03:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 λ、 ；另 2支（管）加入 作為陰性對照。 鱟試劑靈敏度復(fù)核 加樣結(jié)束后，將鱟試劑用封口膜封口，輕輕振動混勻，垂直放入 37℃ 177。 1℃ 恒溫器中，保溫 60177。 2分鐘。 ?結(jié)果觀察 將試管輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn) 180176。 ，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽性，未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁滑脫者為陰性。 陽性 陰性 鱟試劑靈敏度復(fù)核 ?計算 當(dāng)最大濃度 2λ管均為陽性，最低濃度 ，陰性對照為陰性時實驗為有效，按下式計算反應(yīng)終點濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的復(fù)核結(jié)果。 λc=lg1（ ΣX/4） 式中 X 為反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值（ lg）。 反應(yīng)終點濃度是指系列遞減的內(nèi)毒素濃度中最后一個呈陽性結(jié)果的濃度。 鱟試劑靈敏度復(fù)核 ?例子： ?結(jié)果判斷 當(dāng) λc 在 ～ 2λ（包括 2λ）時，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以標(biāo)示靈敏度 λ為該批鱟試劑的靈敏度。 干擾實驗 ?目的 確定供試品在多大的稀釋倍數(shù)或濃度下對內(nèi)毒素和鱟試劑的反應(yīng)不存在干擾作用，為能否使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法提供依據(jù)。 ?當(dāng)進行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗前，或無內(nèi)毒素檢查項的品種建立內(nèi)毒素檢查法時，須進行干擾試驗。 ?當(dāng)鱟試劑、供試品的配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時，須進行干擾試驗。 干擾實驗 ?進行干擾試驗一般步驟 供試品限值確定 根據(jù)鱟試劑的靈敏度確定 MVD范圍 （供試品溶液濃度范圍） 預(yù)試驗（初篩試驗）確定樣品最大不干擾濃度 正式干擾試驗 ?干擾實驗預(yù)實驗 目的 初步確定供試品的最大不干擾濃度（當(dāng)限值以EU/mg或 EU/U活性單位表示）或最小不干擾稀釋倍數(shù)（當(dāng)限值以 EU/ml表示），為正式干擾實驗提供依據(jù) ,避免干擾試驗的盲目性 。 干擾實驗 ?操作方法 將無可檢測到內(nèi)毒素的供試品進行一系列倍數(shù)的稀釋，但最大的稀釋倍數(shù)不得超過 MVD=CL/（ 為現(xiàn)今我國市售鱟試劑的最高靈敏度）。 使用鱟試劑對每一稀釋倍數(shù)進行檢驗。每一稀釋倍數(shù)下做 2支供試品管和 2支供試品陽性對照（即該濃度的供試品稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成 2λ濃度）。另取 2支細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作陰性對照， 2支加入 2λ濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為陽性對照。 例 制備稀釋倍數(shù)為 4的供試品陽性對照溶液：+ 2的供試品稀釋液＝ 2λEU/m
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