細菌內(nèi)毒素檢查ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 03:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 λ、 ；另 2支（管）加入 作為陰性對照。 鱟試劑靈敏度復核 加樣結束后，將鱟試劑用封口膜封口，輕輕振動混勻，垂直放入 37℃ 177。 1℃ 恒溫器中，保溫 60177。 2分鐘。 ?結果觀察 將試管輕輕取出，緩緩倒轉 180176。 ，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽性，未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁滑脫者為陰性。 陽性 陰性 鱟試劑靈敏度復核 ?計算 當最大濃度 2λ管均為陽性，最低濃度 ，陰性對照為陰性時實驗為有效，按下式計算反應終點濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的復核結果。 λc=lg1（ ΣX/4） 式中 X 為反應終點濃度的對數(shù)值（ lg）。 反應終點濃度是指系列遞減的內(nèi)毒素濃度中最后一個呈陽性結果的濃度。 鱟試劑靈敏度復核 ?例子： ?結果判斷 當 λc 在 ～ 2λ（包括 2λ）時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查，并以標示靈敏度 λ為該批鱟試劑的靈敏度。 干擾實驗 ?目的 確定供試品在多大的稀釋倍數(shù)或濃度下對內(nèi)毒素和鱟試劑的反應不存在干擾作用，為能否使用細菌內(nèi)毒素檢查法提供依據(jù)。 ?當進行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗前，或無內(nèi)毒素檢查項的品種建立內(nèi)毒素檢查法時，須進行干擾試驗。 ?當鱟試劑、供試品的配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結果的變化時，須進行干擾試驗。 干擾實驗 ?進行干擾試驗一般步驟 供試品限值確定 根據(jù)鱟試劑的靈敏度確定 MVD范圍 （供試品溶液濃度范圍） 預試驗（初篩試驗）確定樣品最大不干擾濃度 正式干擾試驗 ?干擾實驗預實驗 目的 初步確定供試品的最大不干擾濃度（當限值以EU/mg或 EU/U活性單位表示）或最小不干擾稀釋倍數(shù)（當限值以 EU/ml表示），為正式干擾實驗提供依據(jù) ,避免干擾試驗的盲目性 。 干擾實驗 ?操作方法 將無可檢測到內(nèi)毒素的供試品進行一系列倍數(shù)的稀釋，但最大的稀釋倍數(shù)不得超過 MVD=CL/（ 為現(xiàn)今我國市售鱟試劑的最高靈敏度）。 使用鱟試劑對每一稀釋倍數(shù)進行檢驗。每一稀釋倍數(shù)下做 2支供試品管和 2支供試品陽性對照（即該濃度的供試品稀釋液將內(nèi)毒素標準品制成 2λ濃度）。另取 2支細菌內(nèi)毒素檢查用水作陰性對照， 2支加入 2λ濃度的內(nèi)毒素標準溶液作為陽性對照。 例 制備稀釋倍數(shù)為 4的供試品陽性對照溶液：+ 2的供試品稀釋液＝ 2λEU/m
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