菌種與種子擴(kuò)大培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-05-29 13:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 菌液 2ml于液體培養(yǎng)基中 (300ml三角瓶?jī)?nèi)裝 30ml培養(yǎng)液 )， 120r／ min振蕩培養(yǎng) 4～6h。 6．取中間培養(yǎng)液稀釋分離、培養(yǎng)。 7．挑取菌落進(jìn)行檢測(cè)。 基因的直接進(jìn)化育種 ? 突變 基因突變庫(kù)的建立 ? 篩選 基因突變庫(kù)的篩選 ? 基因復(fù)制與遺傳 步驟： 在分子水平上，對(duì)目標(biāo)基因直接處理，然后通過高通量的篩選方法，提高目標(biāo)蛋白的性能。 ? 能夠利用廉價(jià)的原料 ，簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基，大量高效地合成 產(chǎn)物 ?有關(guān) 合成產(chǎn)物的途徑 盡可能地簡(jiǎn)單，或者說菌種改造的 可操作性要強(qiáng) ? 遺傳性能 要相對(duì)穩(wěn)定 ? 不易感染它種微生物或 噬菌體 ?不是病原菌 ，產(chǎn)生菌及其產(chǎn)物的毒性必須考慮（在分類學(xué)上最好與致病菌無關(guān)） 生產(chǎn)特性要符合工藝要求 ，培養(yǎng)條件易于控制，生長(zhǎng)迅速、發(fā)酵周期短 工業(yè)微生物的要求 防止菌種衰退 ? 衰退的表現(xiàn)： 所需產(chǎn)物的生產(chǎn)能力下降，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝和生長(zhǎng)繁殖能力下降，發(fā)酵周期延長(zhǎng)，抗不良環(huán)境條件的性能減弱等 ? 衰退的原因： ? 內(nèi)因：基因突變，變異菌株性狀分離 ? 外因：菌種保藏不妥；菌種的生長(zhǎng)條件要求沒有得到滿足；或遇到不利的條件，或失去某些需要的條件等；菌種的 連續(xù)傳代 是菌種退化的主要原因 ? 防止衰退的方法： 合理培養(yǎng)條件，減少傳代次數(shù) ? 復(fù)壯： 分離單細(xì)胞，抗性篩選，苛刻條件 純菌種 自發(fā)突變 不純菌種 突變個(gè)體 傳代增殖 原始個(gè)體 工業(yè)微生物菌種保藏技術(shù) (1) 低溫冷凍保藏； (2) 轉(zhuǎn)接培養(yǎng)或斜面?zhèn)鞔２兀? (3) 礦物油保藏； (4) 土壤或陶瓷珠等載體干燥保藏。 保藏原則： 選擇優(yōu)良純種、創(chuàng)造休眠環(huán)境 保藏要求：保持菌種優(yōu)良特性，經(jīng)濟(jì)方便 保藏后需再次檢測(cè)和確定保藏菌種的形態(tài)學(xué)和生化特征 (如代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生 、 酶活力 、 遺傳特征及生化指標(biāo) )。 冷凍保藏： 20℃ 以下冷凍 ， 使微生物代謝活動(dòng)停止 分類：普通冷凍保藏 (20℃ ) 超低溫冷凍保藏 (60一 80℃ ) 液氮冷凍保藏 (156℃ ) 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單有效 培養(yǎng)物運(yùn)輸較困難 在超低溫冷藏柜中保藏菌種的一般方法是： 1． 離心收獲對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期至后期的微生物細(xì)胞 2． 用新鮮培養(yǎng)基重新懸浮所收獲的細(xì)胞； 3． 加入等體積的 20％ 甘油或 10％ 二甲亞砜； 4． 混勻后分裝入冷凍指管或安瓿中 ， 于 70℃ 超低溫冰箱中保藏 。 超低溫冰箱的冷凍速度一般控制在 12℃ ／ min。一些細(xì)菌和真菌菌種可保藏 5年而活力不受影響。 凍干保藏 ：是通過在減壓條件下使凍結(jié)的細(xì)胞懸液中的水分升華 ， 使培養(yǎng)物干燥 。 此法是微生物菌種長(zhǎng)期保藏的最為有效的方法之一 。 特點(diǎn)： ? 凍干狀態(tài)下一般可保藏 10年不喪失活力 ? 凍干后的菌株可常溫保存 ， 便于運(yùn)輸 ? 必須使用冷凍保護(hù)劑 ， 常用脫脂乳 、 蔗糖等 ? 傳代保藏：斜面培養(yǎng)基，平行傳代，普通冰箱，三個(gè)月以下保存，供試驗(yàn)用 ? 礦物油保藏：將瓊脂斜面或液體培養(yǎng)物浸入礦物油中于室溫下保藏，簡(jiǎn)便有效，可用于絲狀真菌、酵母、細(xì)菌和放線菌的保藏。特別用于難以冷凍干燥的絲狀真菌和難以在固體培養(yǎng)基上形成孢子的擔(dān)子菌 ? 載體保藏：麥殼 ， 砂土滅菌后可用作載體 幾種常用菌種保藏方法的比較 方法名稱 主要措施 適宜菌種 保藏期 評(píng)價(jià) 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固體） 石蠟油封藏法 * 沙土保藏法 冷凍干燥法 低溫 低溫 低溫、缺氧 干燥、無營(yíng)養(yǎng) 干燥、無氧、低溫、有保護(hù)劑 各大類 細(xì)菌、酵母菌 各大類 ** 產(chǎn)孢子微生物 各大類 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 簡(jiǎn)便 簡(jiǎn)便 簡(jiǎn)便 簡(jiǎn)便 簡(jiǎn)便、有效 種子： 將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng) ,最終獲得 一定數(shù)量和質(zhì)量的純種 過程。這些純種培養(yǎng)物稱為種子。 種子液質(zhì)量的優(yōu)劣對(duì)發(fā)酵生產(chǎn)起著關(guān)鍵性的作用 。 二、 種子擴(kuò)大培養(yǎng) 種子擴(kuò)培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平 種子的要求： ? 總量及濃度能滿足要求 ? 生理狀況
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