電泳分離ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 18:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，即樣品的 濃縮效應 ，凝膠的 分子篩效應 和 電荷效應 ，由于這三種物理效應，使樣品分離效果好，分辨率高。 ?電位梯度的不連續(xù)性 mCl aCl ＞ m蛋 a蛋 ＞ mGly aGly 1. 濃縮效應 Cl：快離子； Gly：慢離子 ? 電泳進行時，在快離子后面形成一離子濃度低的區(qū)域，該區(qū)域為 低電導區(qū) 。 ? 電導強度與電導成反比，因此，在低電導區(qū)產(chǎn)生較高的電場強度。在快離子和慢離子之間形成一個迅速移動的界面。 ?樣品蛋白質(zhì)聚集在這個移動界面的附近，濃縮為一個狹窄的中間層（濃縮 300多倍）。 移動界面到達濃縮膠和分離膠界面時，凝膠的 pH變化明顯，緩沖液中甘氨酸的解離迅速增加，遷移率超過蛋白質(zhì)分子，隨之高電場強度消失。當?shù)鞍踪|(zhì)分子量和構型不同時，通過分離膠所受到的阻滯程度不同，導致泳動率不同，結(jié)果依據(jù)分子量的大小而分開。 蛋白質(zhì)所帶電荷不同，泳動率也不同，故在同一電場強度中，單位時間內(nèi)各分子遷移的距離存在差異。因此，蛋白質(zhì)樣品經(jīng)分離膠電泳后，若樣品組分的分子量相同，則它們將按電荷順序排列，從而導致分離。 （二 ) 操作 垂直柱狀、板狀的不連續(xù)凝膠電泳系統(tǒng) 組成和配制 樣品的準備 加樣 電泳 檢測 1. 不連續(xù)凝膠電泳系統(tǒng)的組成和配制 （ 1）緩沖液系統(tǒng) ? 濃縮凝膠緩沖液 , ? 分離凝膠緩沖液 , ? 電極緩沖液系統(tǒng) （三羥甲基氨基甲烷） (甘氨酸 ) ? 樣品緩沖液 ， pH , 40%甘油、 酚藍 PH PH PH PH （ 2）不連續(xù)電泳濃縮膠和分離膠的配方 貯存液 凝膠終濃度 T 4% % 10% 15% 20% 單體貯液（ :）
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