電泳分離ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 18:03本頁(yè)面
【正文】 5. 檢測(cè) 三、 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDSPAGE） 在蛋白質(zhì)樣品和凝膠中加入 SDS和還原劑后，分子被解聚成多肽鏈，它們與 SDS充分結(jié)合形成帶負(fù)電荷的 SDS－蛋白質(zhì)復(fù)合物，所帶的電荷大大超過(guò)了蛋白質(zhì)原有的電荷量，消除了不同分子原有的電荷差異。電泳的遷移率不再受電荷的影響，而只與蛋白質(zhì)或亞基的分子量大小有關(guān)。 （一）基本原理 lgM= a bRf 影響 SDS蛋白質(zhì)結(jié)合的因素 SDS的濃度 pH、離子強(qiáng)度 （二）、操作 凝膠濃度根據(jù)待測(cè)樣品分子量大小決定，凝膠用含 %SDS的 ，ACR： Bis=29： 1。 凝膠濃度的選擇 樣品制備 樣品溶于含 1%SDS、 %巰基乙醇的。上樣前置 100oC水浴中密閉煮 25min。 電泳條件 電極液為含 %SDS的 。 固定與染色 Tissue preparation 源組織 微量離心管 溴酚藍(lán) 旋渦 Preparing acrylamide gels 濃縮膠 /分離膠配置 Preparing acrylamide gels 異丙醇（水） Electrophoresis 電泳緩沖液 Electrophoresis 染色 銀染法 考馬斯亮藍(lán)染色法 Gel Blue Coomassie Coomassie solution 考馬斯亮藍(lán)溶液 SDS凝膠電泳掃描與染色圖譜 M S S S1 M S1 M S2 S2 （三）蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率與分子量的計(jì)算 蛋白質(zhì)分子量的計(jì)算 ，其分子量應(yīng)包含欲測(cè)分子的大小。 、構(gòu)形與標(biāo)準(zhǔn)分子類(lèi)似。 。 ，相應(yīng)分子量的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 lgM= a bRf Rf= 蛋白質(zhì)遷移距離 溴酚藍(lán)遷移距離 Migration of proteins in SDS gels of varying acrylamide concentrations (%T). 9個(gè)蛋白質(zhì)：分子量 94 kDa —— kDa
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