sdspage電泳ppt課件(2)-資料下載頁
2025-01-14 07:31本頁面
【正文】 入 ,否則凝結(jié)無法注膠 。 注膠過程最好一次性完成 ,避免產(chǎn)生氣泡 。 （ 3） 梳子需一次平穩(wěn)插入 ,梳口處不得有氣泡 ,梳底需水平 。 （ 4） 微量注射器 （ 加樣器 ） 上樣時 , 注射器不可過低 ,以防刺破膠體；也不可過高 , 樣品下沉時易發(fā)生擴散 ， 溢出加樣孔 。 （ 5） 剝膠時要小心 ,保持膠完好無損 ,染色要充分。 （ 6）聚丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時要戴手套。 思考題 : ? 1. SDS在該電泳方法中的作用是什么？ ? 2. 在 SDSPAGE中 TEMED和 AP的作用 ? 濃縮膠的作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區(qū)帶。當樣品液和濃縮膠選 Tris/HCL緩沖液，電級液選Tris/甘氨酸。電泳開始后， HCL解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質(zhì)帶負電荷，因此一起向正極移動，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。電泳開始時氯離子泳動率最大，超過蛋白，因此在后面形成低電導區(qū)，而電場強度與低電導區(qū)成反比，因而產(chǎn)生較高的電場強度，使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動，形成以穩(wěn)定的界面，使蛋白聚集在移動界面附近，濃縮成一中間層
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