等電聚焦電泳ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 02:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 基團或化合物用共聚或接枝的方法固定在載體上形成兩性載體。載體可以是聚丙烯酞胺凝膠或葡聚糖等。被固定的化合物可以是帶羧基的酸或帶叔胺基的堿。采用這種方法可以形成穩(wěn)定的 pH梯度。但成本太高。 ? 固定化兩性載體和兩性緩沖液相結合。 ? 利用離子交換劑建立 pH梯度。 Sluyterma(1978)利用離子交換劑建立一個有 pH梯度的柱進行等電聚焦，稱為色譜聚集。 ? 由外循環(huán)建立的 pH梯度， Rilbe(1978)在兩電極室把溶液進行循環(huán)，以在電泳分離室中建立一個穩(wěn)定的 pH梯度，稱為流動電解。 ? 緩沖液更新的方法。在電泳過程中，溶液的離子會產(chǎn)生電遷移。在兩個電極室中離子的消耗或積累，可由外部加和或取出加以平衡，以維持電泳池中緩沖液的組成和 pH等流量泵不變。 流動電解 兩性介質載體的選擇 ? 易溶于水，理想的兩性電解質載體應在 pI處有足夠的緩沖能力及電導，前者保證 pH梯度的穩(wěn)定，后者允許一定的電流通過。 ? 不同 pI的兩性電解質應有相似的電導系數(shù)從而使整個體系的電導均勻。 ? 兩性電解質的分子量要小，易于應用分子篩或透析方法將其與被分離的高分子物質分開，而且不應與被分離物質發(fā)生反應或使之變性。 ? 化學性能穩(wěn)定，與被分離物質不起化學反應，也無變性作用。 ? pH梯度制作利用的兩性電解質是脂肪族多胺和多羧類的同系物，他們具有相近但不同的 pKa和 pI值。在外電場作用下，自然形成 pH梯度。 電場下載體兩性電解質的變化 在沒有電場時 ,載體兩性電解質溶液的 pH值大約是該溶液 pH范圍的平均值 (如 pH310的載體兩性電解質溶液 ,其 pH約為 )。所以載體兩性電解質分子都帶有電荷，只是在溶液中的正電荷和負電荷數(shù)目相等，凈電荷為零。 引入電場時，載體兩性電解質分子分別向陰極和陽極移動，最終在分子凈電荷為零的位置停止遷移。 (1
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