毛細管電泳法ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 03:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（ SDS）， 可以使壁表面負電荷增加， zeta電勢增大，電滲流增大； （ 3）加入有機溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。 5 添加劑的影響 HPCE中的組分遷移速度 電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的 5～ 7倍； 各種電性離子在石英毛細管柱中的遷移速度為： u+ =uef + uos 陽離子運動方向與電滲流 一致 ； u = uef uos 陰離子運動方向與電滲流 相反 ； u0 =uos 中性粒子運動方向與電滲流一致； （ 1）可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子的分離； （ 2）改變電滲流的大小和方向可改變分離效率和選擇性，如同改變 LC中的流速； （ 3）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性； 在 HPCE中，控制電滲流非常重要 。 分離效率 （保留時間） HPCE兼具有電化學(xué)的特性和色譜分析的特性。有關(guān)色譜理論也適用。 VLLELuLtapdapdapd?????? ??V— 外加電壓； L— 毛細管總長度； （塔板數(shù)） 在 HPCE中，僅存在縱向擴散， σ 2=2Dt 22/1。22 ???????????YtnDELDLVLn Rdapdap ?? 擴散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴散系數(shù)大的分離效率高，分離生物大分子的依據(jù)。 2/1241????????????apde f f DLVLR??影響分離度的主要因素；工作電壓 V； 毛細管有效長度與總長度比；有效淌度差。分離度可按譜圖直接由下式計算： 1212 )(2WWttR???影響分離效率的因素 — 區(qū)帶展寬 1. 流型 電荷均勻分布，整體移動， 電滲流的流動為平流 ， 塞式流動 （譜帶展寬很?。?； 液相色譜中的溶液流動為層流， 拋物線流型 ，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的 2倍（引起譜帶展寬較大）。 在 HPCE中，縱向擴散引起的峰展寬： σ 2=2Dt 由擴散系數(shù)和遷移時間決定。大分子的擴散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率，大分子生物試樣分離的依據(jù)。 當(dāng)進樣塞長度太大時，引起的峰展寬大于縱向擴散。分離效率明顯下降；實際操作時進樣塞長度小于或等于毛細管總長度的 1%～ 2%。 電泳過程中會產(chǎn)生的大量焦耳熱。在散熱過程中，在毛細管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬。 改善方法： （ 1）減小毛細管內(nèi)徑； （ 2）控制散熱。 存在吸附與疏水作用，造成譜帶展寬； 蛋白質(zhì)、多肽帶電荷數(shù)多，有較多的疏水基，吸附問題特別嚴重，是目前分離分析該類物質(zhì)的一大 難題 。 細內(nèi)徑毛細管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機會。 減小吸附的方法和途徑 ：加入兩性離子代替強電解質(zhì)，兩性離子一端帶正電，
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