等電聚焦電泳ppt課件(編輯修改稿)
2025-04-18 01:34 本頁面
【文章內容簡介】 大 pH 高 低 關鍵是形成 pH梯度 pH梯度的組成 pH梯度的組成方式有二種，一種是人工 pH梯度，由于其不穩(wěn)定， 重復性較差，現已不再使用。另一種是天然 pH梯度。天然 pH梯度的建立是在水平板或電泳管正負極間引入等電點彼此接近的一系列兩性電解質的混合物，在 正極端吸入酸液 ，如硫酸、磷酸或醋酸等，在 負極端引入堿液 ，如氫氧化鈉、氨水等。 pH梯度的組成 電泳開始前兩性電解質的混合物 pH為一 均值 ，即各段介質中的 pH相等 ，用pH0表示。電泳開始后，混合物中 pH最低的分子，帶 負電荷最多 ， pI1為其等電點，向正極移動速度最快，當移動到正極附近的酸液界面時， pH突然下降，甚至接近或稍低于 pI1，這一分子不再向前移動而停留在此區(qū)域內 。 pH梯度的組成 由于兩性電解質具有一定的緩沖能力，使其周圍一定的區(qū)域內介質的 pH保持在它的等電點范圍。 pH稍高的第二種兩性電解質，其等電點為 pI2，也移向正極，由于 pI2＞ pI1，因此定位于第一種兩性電解質之后，這樣，經過一定時間后，具有不同等電點的兩性電解質按各自的等電點依次排列，形成了從 正極到負極 等電點遞增，由 低到高 的線性 pH梯度。 pH梯度支持介質 常用的 pH梯度支持介質有聚丙烯酰胺凝膠、 瓊脂糖凝膠 、葡聚糖凝膠等，其中聚丙烯酰胺凝膠為最常應用。 瓊脂糖凝膠 （ agarose gel ） ， 依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構，網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。
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