等電聚焦電泳ppt課件(編輯修改稿)
2025-04-18 01:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 大 pH 高 低 關(guān)鍵是形成 pH梯度 pH梯度的組成 pH梯度的組成方式有二種，一種是人工 pH梯度，由于其不穩(wěn)定， 重復(fù)性較差，現(xiàn)已不再使用。另一種是天然 pH梯度。天然 pH梯度的建立是在水平板或電泳管正負(fù)極間引入等電點彼此接近的一系列兩性電解質(zhì)的混合物，在 正極端吸入酸液 ，如硫酸、磷酸或醋酸等，在 負(fù)極端引入堿液 ，如氫氧化鈉、氨水等。 pH梯度的組成 電泳開始前兩性電解質(zhì)的混合物 pH為一 均值 ，即各段介質(zhì)中的 pH相等 ，用pH0表示。電泳開始后，混合物中 pH最低的分子，帶 負(fù)電荷最多 ， pI1為其等電點，向正極移動速度最快，當(dāng)移動到正極附近的酸液界面時， pH突然下降，甚至接近或稍低于 pI1，這一分子不再向前移動而停留在此區(qū)域內(nèi) 。 pH梯度的組成 由于兩性電解質(zhì)具有一定的緩沖能力，使其周圍一定的區(qū)域內(nèi)介質(zhì)的 pH保持在它的等電點范圍。 pH稍高的第二種兩性電解質(zhì)，其等電點為 pI2，也移向正極，由于 pI2＞ pI1，因此定位于第一種兩性電解質(zhì)之后，這樣，經(jīng)過一定時間后，具有不同等電點的兩性電解質(zhì)按各自的等電點依次排列，形成了從 正極到負(fù)極 等電點遞增，由 低到高 的線性 pH梯度。 pH梯度支持介質(zhì) 常用的 pH梯度支持介質(zhì)有聚丙烯酰胺凝膠、 瓊脂糖凝膠 、葡聚糖凝膠等，其中聚丙烯酰胺凝膠為最常應(yīng)用。 瓊脂糖凝膠 （ agarose gel ） ， 依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的疏密依靠瓊脂糖的濃度。
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