【文章內(nèi)容簡介】 可根據(jù)情況，每天 2次或多次觀察直到試驗周期結(jié)束。 急性毒性試驗觀察周期一般為 728天 。 （八）觀察時間和周期 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄改良寇氏法（ Karber） 霍恩氏法（ Horn） 威爾氏法（ Weil） 概率單位法 其他計算方法 （九） LD50的計算方法 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄? ? 四、急性毒性分級和評價 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄? ? 四、急性毒性分級和評價 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄四、急性毒性分級和評價 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄四、急性毒性分級和評價 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄四、急性毒性分級和評價 LD50標志著一個化合物毒性的大小，所以常用作急性毒性分級。 毒性大小于 LD50值成反比， LD50越小，毒性越大，反之，毒性越小。 除了 LD50以外，還應(yīng)當(dāng)報告 LD50 95%可信限范圍、急性毒作用帶等指標，并盡可能詳盡描述中毒特征、癥狀表現(xiàn)、出現(xiàn)時間、死亡前兆、毒性作用的發(fā)生、發(fā)展、恢復(fù)經(jīng)過，以及體重、剖檢和病理學(xué)變化等。從而全面的對急性毒性做出評價。 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄五、經(jīng)典急性毒性試驗的局限性 LD50僅僅是一個近似值 的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息。 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄一、基本概念 二、試驗?zāi)康? 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計及其評價 第二節(jié) 亞慢性毒性作用及其試驗與評價方法 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄一、基本概念 亞慢性毒性作用是指試驗動物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來化學(xué)物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)。 試驗染毒期限應(yīng)為 3～ 6個月，或一般為實驗動物生命期的 1/10~1/30。 如用小鼠，試驗期通常為 3個月，大鼠3~6個月，狗 4~12個月。 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄二、試驗?zāi)康? （ 1）進一步探索受試物的毒作用特點和靶器官； （ 2）了解受試物有無蓄積作用，是否產(chǎn)生耐受性； （ 3）分析受試物的劑量 效應(yīng)關(guān)系； （ 4）初步估計不出現(xiàn)毒性作用的最大耐受劑量（ NOEL或 NOAEL）和出現(xiàn)毒性的最小有作用劑量（ MED）； （ 5）為慢性毒性試驗的劑量設(shè)計和觀察指標提供依據(jù)； （ 6）為受試物的毒理機制提供基礎(chǔ)資料。 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 在遺傳毒理學(xué)及一些前期的試驗難以做出明確評價時需要進行亞慢性毒性試驗。 根據(jù)前期的試驗結(jié)果來設(shè)計亞慢性毒性試驗，其試驗的周期從幾個月到一年不等。 在整個亞慢性試驗期間，動物均應(yīng)攝食試驗飼料。受試物可摻入飼料中，也可摻入飲水中。不得巳時可采用灌胃法進行。 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄實驗動物的選擇 （ l）物種和品系 一般要求兩種實驗動物，一種是嚙齒類，一種是非嚙齒類，以便全面地了解受試物的毒性。 基本上均使用大鼠和犬，有時用猴，這取決于受試物的重要性和試驗條件。亞慢性經(jīng)皮毒性試驗，可用兔或豚鼠。 大鼠常用 Wistar和 SpragueDawley。 犬的亞慢性毒性試驗多使用 Beagle犬。 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄（ 2）性別、年齡和動物數(shù) 性別：一般每組雌雄各半； 年齡：剛斷乳不就得動物 大鼠 6～ 8周齡（體重 80～ 100g） 動物數(shù)：大鼠、小鼠每組不少于 20只； 犬、猴每組不少于 6只。 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄（ 3）微生物學(xué)寄生蟲學(xué)等級和飼養(yǎng)環(huán)境： 亞慢性毒性試驗周期較長，觀察指標較多，實驗動物的質(zhì)量、喂飼條件和試驗環(huán)境明顯影響受試物的毒性反應(yīng)。 實驗動物分四級：普通級、清潔級、無特定病原體級（ SPF級）、無菌級。 犬和猴分為普通級和 SPF兩級。 亞慢性毒性試驗，應(yīng)使用清潔級及以上等級大小鼠，并飼養(yǎng)在屏障環(huán)境內(nèi)進行試驗。 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄染毒方式 一是應(yīng)當(dāng)盡量選擇和人類接觸途徑相似的方式； 二是應(yīng)當(dāng)與預(yù)期進行的慢性毒作用研究的接觸途徑相一致。 一般以經(jīng)口、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮染毒為多。 染毒頻率通常每日一次，連續(xù)給予，如試驗期為 3個月或超過 3個月時，也可每周 6次。 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄染毒途徑 （ l）經(jīng)口染毒：灌胃法、喂飼法、膠囊法。 （ 2）經(jīng)呼吸道染毒： （ 3）注射： （ 4）特殊途徑： （ 5）在進行亞慢性毒性試驗時，最好結(jié)合進行毒代動力學(xué)血藥濃度的監(jiān)測。 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄劑量選擇和分組 一般至少應(yīng)設(shè) 3個劑量組和 1個陰性（溶劑）對照組。 陰性對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組 組距： 3~10倍，最低不小于 2倍 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 高劑量組應(yīng)能引起明顯的毒性或少量動物的死亡（少于 10%）。 低劑量組應(yīng)無中毒反應(yīng)，相當(dāng)于未觀察到有害作用劑量（ NOAEL）。 高低劑量組間設(shè)置 1個中劑量組，比較理想的中劑量組約相當(dāng)于觀察到有害作用的最低劑量（ LOAEL）。 ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄原則是，盡量控制在受試動物在整個試驗期既不發(fā)生死亡，又有明顯毒性反應(yīng)。 各組劑量設(shè)計的依據(jù)： ① 高劑量組：以急性毒性的閾劑量作為亞慢性毒性試驗的最高劑量。 或以該受試物 LD50的 1/20～ 1/5作為最高劑量 ② 一般在 LD50的 1/10～ 1/50之間按等比級數(shù)設(shè)計其它各組。 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 4. 觀察指標 1 2 3 4 三、亞慢性毒性試驗設(shè)計 （ 1）一般性指標 包括每日采食量、體重變化（定期稱量）、外觀特征（被毛光澤、精神狀態(tài)、呼吸動作、分泌物、排泄物、飲食、活動、行為等）、異常表現(xiàn)和中毒癥狀等。 （ 2）實驗室檢查： ?上一內(nèi)容 ?回主目錄 ?返回 ?下一內(nèi)容 ?返回 上一內(nèi)容 下一內(nèi)容 回主目錄l）血液學(xué)檢查 2）血液生化檢查 通常為 血清 天門冬氨酸氨