生物分離與純化技術(shù)復(fù)習(xí)重點(diǎn)(編輯修改稿)
2025-05-14 07:02 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 離子交換技術(shù)的一般流程：原料液的預(yù)處理——原料液與離子交換樹(shù)脂的充分接觸——淋洗交換樹(shù)脂——把離子交換樹(shù)脂上的有用物質(zhì)解吸并洗脫下來(lái)——離子交換樹(shù)脂的再生。：首先選好柱子，一般柱子的直徑與長(zhǎng)度比為1:10~50；凝膠柱可以選1:100~200，同時(shí)將柱子洗滌干凈。將層析用的基質(zhì)（如吸附劑、樹(shù)脂、凝膠等）在適當(dāng)?shù)娜軇┗蚓彌_液中溶脹，并用適當(dāng)濃度的酸（~1N）、堿（~1N）、鹽（~1M）溶液洗滌處理，以除去其表面可能吸附的雜質(zhì)。然后用去離子水（或蒸餾水）洗滌干凈并真空抽氣（吸附劑等與溶液混合在一起），以除去其內(nèi)部的氣泡。關(guān)閉層析柱出水口，并裝入1/3柱高的緩沖液，并將處理好的吸附劑等緩慢地倒入柱中，使其沉降約3cm高。打開(kāi)出水口，控制適當(dāng)流速，使吸附劑等均勻沉降，并不斷加入吸附劑溶液。（吸附劑的多少根據(jù)分離樣品的多少而定。）最后使柱中基質(zhì)表面平坦并在表面上留有2~3cm高的緩沖液，同時(shí)關(guān)閉出水口。原理：親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應(yīng)的抗體（或抗原）發(fā)生特異性結(jié)合，而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應(yīng)抗體（或抗原）選擇性地結(jié)合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開(kāi)，達(dá)到分離提純的目的。影響吸附劑親和力的因素：配基濃度；空間障礙；配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)；載體孔徑。概念：固定相由非極性物質(zhì)(如烴類(lèi)、苯基等)組成的層析。非極性分子間或分子的非極性基團(tuán)間具有吸引力，不同分子的非極性基團(tuán)與固定相非極性物質(zhì)結(jié)合的強(qiáng)弱不同，從而達(dá)到分離。多用于蛋白質(zhì)分析和分離。原理：蛋白質(zhì)表面一般有疏水與親水集團(tuán)，疏水層析是利用蛋白質(zhì)表面某一部分具有疏水性，與帶有疏水性的載體在高鹽濃度時(shí)結(jié)合。在洗脫時(shí)，將鹽濃度逐漸降低，因其疏水性不同而逐個(gè)地先后被洗脫而純化，可用于分離其它方法不易純化的蛋白質(zhì)。概念：在推動(dòng)力或者其他外力作用下懸浮液（或含固體顆粒發(fā)熱氣體）中的液體（或氣體）透過(guò)介質(zhì)，固體顆粒及其物質(zhì)被過(guò)濾介質(zhì)截留，從而使固體及其他物質(zhì)與液體（或氣體）分離的操作。原理：利用物質(zhì)的溶解性差異，將液體和不溶于液體的固體分離開(kāi)來(lái)的一種方法類(lèi)型：（1）常規(guī)過(guò)濾（2）錯(cuò)流過(guò)濾 濾餅作用助濾劑原理：通過(guò)加入助濾劑改變進(jìn)入濾池之前的顆?；?yàn)V料表面性質(zhì)、電性與尺寸。改變?yōu)V料表面性質(zhì)可提高顆粒向?yàn)V料遷移速度與黏附效率；改變進(jìn)入濾池懸浮顆粒的表面性質(zhì)與尺寸可提高顆粒黏附效率。按照該機(jī)理形成的聚合物–顆粒絮體，
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