酶的分離與純化ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 20:17 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 乙醇作為沉淀劑。 （ 3）影響有機(jī)溶劑沉淀的因素 1）溫度 2） pH 3） 離子強(qiáng)度 4）蛋白質(zhì)濃度 等電點(diǎn)法 (isoelectric precipitation) 其他沉淀法 （六）萃取分離 (extraction) 概念 :P154 溶劑萃取法 比沉淀分離程度高 ,比離子交換法選擇性好 , 傳質(zhì)速度快 ,生產(chǎn)周期段 ,便于連續(xù)操作 ,容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 . 雙水相萃取法 (Partion of two aqueous phase extraction) 用兩種不相溶的親水性高分子聚合物水溶液進(jìn)行萃取 . 超臨界流體萃取法 反膠團(tuán)萃取法 ? 雙水相萃取法 ? 雙水相： 將兩種不同的水溶性聚合物的水溶液混和時(shí)，當(dāng)聚合物濃度達(dá)到一定值，體系會(huì)自然地分成互不相溶的兩相。 ? 如： 當(dāng)明膠與瓊脂或明膠與可溶性淀粉的水溶液混合時(shí)，就得到一個(gè)渾濁不透明的溶液，它隨之分成兩個(gè)液相，這就是雙水相體系。 ? 用于生物分離的高聚物體系有：聚乙二醇 (簡稱 PEG)／ 葡聚糖 (簡稱Dextran)和 PEG／ Dextran硫酸鹽體系。常見的高聚物／無機(jī)鹽體系為：PEG／ 硫酸鹽或磷酸鹽體系。 ? 原理： 生物物質(zhì)在雙水相體系中的選擇性分配。 (酶、蛋白質(zhì)等生物大分子的分配系數(shù)大致在 )。 ? 各種雙水相系統(tǒng) ? 雙水相系統(tǒng)的應(yīng)用 二、酶的精制 根據(jù)原理 ,酶的純化方法分為 : 1)沉淀法 。2)相分配法 。3)柱層析法 。4)電泳或離心法。 酶純化的基本原則 : 1)建立方便靈敏的分析方法 。 2)選擇有效的純化方法 。 3)盡量避免變性 。 4)盡量避免過度暴露于空氣中 . 酶的理化性質(zhì)與分離純化方法 理化性質(zhì) 分離及純化方法 分子大小和形態(tài) 溶解度 電荷差異 生物功能專一性 差速離心 、 超濾 、 分子篩 、 透析 鹽析 、 萃取 、 分配層析 、 結(jié)晶 電泳 、 等電聚焦電泳 、 離子交換層析 親和層析 （一）膜分離 原理 利用溶液中溶質(zhì)分子的大小、形狀、性質(zhì)等的 差別 ,對于各種薄膜表現(xiàn)出不同的可透性而達(dá)到分離的目 的。 膜分離技術(shù)分為反滲透 (RO)、超濾 (UF)、納濾 (NF)、 微濾 (MF)。主要區(qū)別在于膜孔徑的大小。酶純化中常用的 是超濾和微濾 ,特別是濃縮和脫鹽。 幾種膜分離技術(shù)特點(diǎn) 透析 (dialysis) 原理 P159 1)透析膜 纖維素或其衍生物制成。透析袋已經(jīng)商品化。 2)透析袋預(yù)處理 3)透析方法及裝置 原理 P164165 利用具有一定孔徑的微孔濾膜，對生物大分子溶液進(jìn)行過濾（常壓、加壓或減壓），使大分子保留在超濾膜上面的溶液中，小分子物質(zhì)及水過濾出去，從而達(dá)到脫鹽、更換緩沖液或濃縮的目的。這種利用超濾膜過濾分離大分子和小分子物質(zhì)的方法叫做超濾法。超濾膜的截留分子量范圍從 5000到 500000。 透析方法示意圖 超濾工作示意圖 （二）凝膠過濾法 (gel filtration) 原理 凝膠的種類 1. 交聯(lián)葡聚糖凝膠結(jié)構(gòu)的示意圖 葡聚糖凝膠的種類和規(guī)格 凝膠過濾技術(shù) 凝膠過濾技術(shù)的應(yīng)用 （三）離子交換層析 (Ion Exchange Chromatography,IEC) 原理 離子交換吸附洗脫示意圖 離子交換劑 離子交換技術(shù)： P182 （四）疏水層析 (Hydrophobic Chromatography) 原理 一些疏水性較強(qiáng)的介質(zhì)對疏水性較大的蛋白質(zhì)有較強(qiáng)的 吸附作用，而且吸附后不容易被洗脫下來。盡管多數(shù)蛋白質(zhì) 都溶于水，具有較強(qiáng)的親水性，但實(shí)際上分子內(nèi)部都存在著 一個(gè)疏水核心中心，分子構(gòu)象十分復(fù)雜。分子內(nèi)部都不同程 度存在著一些疏水基團(tuán)或疏水中心區(qū)。如蛋白質(zhì)表面含有某 些非極性氨基酸側(cè)鏈，其中包括 Leu、 Phe、 Trp、 Ala、 Pro等 氨基酸，這些非極性氨基酸側(cè)鏈組成了蛋白質(zhì)疏水核心中 心，決定了蛋白質(zhì)的疏水性質(zhì)。 P188 疏水層析介質(zhì)： P188 疏水層析技術(shù)： P189 （五）吸附層析 (Absorption Chromatography) 原理 液一固吸附層析是運(yùn)用較多的一
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