生物分離與純化技術(shù)復(fù)習(xí)重點(diǎn)-在線瀏覽
2025-06-04 07:02本頁(yè)面
【正文】 提取蛋白質(zhì)；分離有機(jī)酸；應(yīng)用酶反應(yīng)和酶萃取；液膜包裹。影響鹽析的因素：鹽飽和度；蛋白質(zhì)濃度；PH值；溫度鹽加入方式：（1）加硫酸銨的飽和溶液。等電點(diǎn)概念：蛋白質(zhì)或兩性電解質(zhì)(如氨基酸)所帶凈電荷為零時(shí)溶液的pH，此時(shí)蛋白質(zhì)或兩性電解質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移率為零。過程：過飽和溶液的形成；晶核的生成；晶體的生長(zhǎng)。方法：鹽析法；加飽和鹽溶液；透析法；有機(jī)溶劑（直接加有機(jī)溶劑或者利用揮發(fā)性溶劑蒸發(fā)結(jié)晶）；等電點(diǎn)；其它（溫度差，加入金屬離子）等。常用有機(jī)溶劑：乙醇、丙酮、甲醇等。概念：是應(yīng)用離子交換劑作為吸附劑，通過靜電引力將溶液中帶相反電荷的物質(zhì)吸附在離子交換劑上，然后用合適的洗脫機(jī)將吸附物從離子交換劑上洗脫下來，從而達(dá)到分離、濃縮、純化的目的。分類；：（1）聚苯乙烯型樹脂（2）聚苯烯酸型樹脂（3）多乙烯多氨—環(huán)氧氯苯烷樹脂（4）酚醛樹脂 ：（1）凝膠型樹脂（2）大網(wǎng)格樹脂（3）均孔樹脂 ：陽(yáng)離子交換樹脂：（1）強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂（磺酸基團(tuán)和次甲酸磺酸基團(tuán)）（2）弱酸性陽(yáng)離子交換樹脂（羧基和酚羥基）陰離子交換樹脂:（1）強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂（季銨基團(tuán)）（2）弱堿性陰離子交換樹脂（伯胺基。影響離子交換樹脂選擇因素：離子化合價(jià)；離子的水化半徑；溶液濃度；離子強(qiáng)度；溶液的PH；有機(jī)溶劑的影響；樹脂的物理結(jié)構(gòu)的影響；樹脂與離子間的輔助力影響離子交換速度的因素：樹脂粒度；樹脂的交聯(lián)度；溶液流速；溫度；離子的大小；離子的化合價(jià)；離子濃度。：首先選好柱子，一般柱子的直徑與長(zhǎng)度比為1:10~50；凝膠柱可以選1:100~200，同時(shí)將柱子洗滌干凈。然后用去離子水（或蒸餾水）洗滌干凈并真空抽氣（吸附劑等與溶液混合在一起），以除去其內(nèi)部的氣泡。打開出水口，控制適當(dāng)流速，使吸附劑等均勻沉降，并不斷加入吸附劑溶液。）最后使柱中基質(zhì)表面平坦并在表面上留有2~3cm高的緩沖液，同時(shí)關(guān)閉出水口。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應(yīng)抗體（或抗原）選擇性地結(jié)合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開，達(dá)到分離提純的目的。概念：固定相由非極性物質(zhì)(如烴類、苯基等)組成的層析。多用于蛋白質(zhì)分析和分離。在洗脫時(shí)，將鹽濃度逐漸降低，因其疏水性不同而逐個(gè)地先后被洗脫而純化，可用于分離其它方法不易純化的蛋白質(zhì)。原理：利用物質(zhì)的溶解性差異，將液體和不溶于液體的固體分離開來的一種方法類型：（1）常規(guī)過濾（2）錯(cuò)流過濾 濾餅作用助
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