醫(yī)藥衛(wèi)生]層析分離純化技術(shù)-在線瀏覽
2025-02-21 04:55本頁面
【正文】 2830 000 Thrombin: Mr 37 000 PreScission? Protease: Mr 46 000 Glutathione Sepharose? Mr 26 000 10C 5 任何規(guī)模純化都比較簡(jiǎn)單 預(yù)裝柱 /填料 一次可純化 GST 注意 融合蛋白的量 GST MicroSpin? 〈 400 181。g 立即可用 , 預(yù)裝柱 , Purification Module 緩沖液和試劑 和 MicroPlex? 24 Vacuum 結(jié)合使用可以大大增加處理量 (一次處理 〈 48 樣品 ) GSTrap? 1 ml 10 12 mg 立即可用 , 預(yù)裝柱 GSTrap 5 ml 50 60 mg 立即可用 , 預(yù)裝柱 Glutathione Sepharose? 4B 8 mg / ml 可自行裝柱 Glutathione Sepharose 4 10 12 mg / ml 可自行裝柱，使用層析系統(tǒng)快速純化， Fast Flow 適合放大 6 GST MicroSpin? Purification Module ? 立即可用 , 50 預(yù)裝柱含緩沖液和所需試劑 ? 可純化每柱 400 181。l 樣品 適合蛋白質(zhì)擴(kuò)增系統(tǒng)篩選和優(yōu)化，小規(guī)模純化 7 GSTrap? 柱 ? 20 分鐘內(nèi) ? 每 1 ml 柱 12 mg 或 每 5 ml 柱 60 mg ? 使用針筒，蠕動(dòng)泵，或者 196。KTA?explorer 10 1: 低分子量標(biāo)記 (LMW) Calibration kit, 還原 , Amersham Pharmacia Biotech 2: 胞漿萃取液 , 1 g /10 ml 3: 洗脫 GST 融合蛋白 10 Glutathione Sepharose? Fast Flow 適合裝填在高效層析柱中和層析系統(tǒng)結(jié)合使用，并用作放大 ? 每毫升填料可以純化 12 mg 融合蛋白 ? 裝在 XK 空柱中和 196。g 立即可用 , 預(yù)裝柱 , Purification Module 緩沖液和試劑 和 MicroPlex? 24 Vacuum 結(jié)合使用可以大大增加處理量 (一次處理 〈 48 樣品 ) HiTrap? Chelating 1 ml 〈 12 mg 立即可用 , 預(yù)裝柱 HisTrap? Kit 〈 12 mg/柱 含預(yù)裝柱和足夠 12 純化的緩沖液 HiTrap Chelating 5 ml 〈 60 mg 立即可用 , 預(yù)裝柱 Chelating Sepharose? Fast Flow 〈 12 mg/ml 自行裝填到空柱和放大用 16 His MicroSpin? 純化模組 ? 立即可用 , 50 預(yù)裝柱連緩沖液和試劑 ? 每柱可純化達(dá) 100 181。l 樣品 適合蛋白質(zhì)擴(kuò)增系統(tǒng)的篩選和優(yōu)化，小規(guī)模純化 17 HisTrap? Kit ? 每根 HiTrap? Chelating 金屬螯合柱可在少於 25 分鐘中純化 12 mg 融合蛋白 ? 包含所需濃縮緩沖液和工具 ? 使用針筒，蠕動(dòng)泵，或者 196。KTA? 平臺(tái)純化系統(tǒng)連接使用 ? 高流速 ? 兼容添加劑 21 檢測(cè) (His)6 融合蛋白 檢測(cè)方法 注意 ELISA 測(cè)定＋標(biāo)記 IgG 高特異性，只檢測(cè) (His)6 融合蛋白 功能測(cè)定 可有效評(píng)估純化出來的 (His)6 融合蛋白是否具備 活性 不一定能買到 可能需要自行設(shè)計(jì)和優(yōu)化 22 檢測(cè) (His)6 融合蛋白 檢測(cè)方法 注意 使用抗 His 抗體和 高度特異 , 只檢測(cè) (His) 6 融合蛋白 ECL? 檢測(cè)系統(tǒng)的 使用適當(dāng)濃度的二級(jí) HRP標(biāo)記抗體可以 免疫印跡法 使背景大大減低，甚至去掉 ECL 檢測(cè)系統(tǒng)提高免疫印跡的檢測(cè)能力 ECL 提供大部分重組表達(dá)應(yīng)用所需的靈敏度 需要更高靈敏度時(shí)使用 ECL Plus. SDSPAGE ＋ Coomassie? 提供分子量大小和 % 純度訊息 . 考馬氏染色或銀染 可檢測(cè)融合蛋白和污染物 . 23 其他融合 或 非融合蛋白的純化 (1/3) ? 如果有對(duì)應(yīng)配基，使用親和層析 ?一步純化 ?高靈敏度 ?高載量 24 其他融合 或 非融合蛋白的純化 (2/3) 立即可用的 HiTrap 柱 應(yīng)用 預(yù)裝柱 抗體分離 所有來源的 IgG， 其亞族，和片斷 HiTrap Protein A 和 HiTrap rProtein A 包括人源 IgG3 ， 小鼠 IgG1和大鼠 IgG HiTrap Protein G 的 IgG， 其亞族，和片斷 腹水，血請(qǐng)，體液，和細(xì)胞培養(yǎng)液的 MAbTrap? GII (HiTrap Protein G column (1 ml), 單克隆和多克隆 IgG 工具 , 濃縮緩沖液 ) 雞蛋請(qǐng)的 IgY HiTrap IgY 單克隆和人源 IgM HiTrap IgM 25 其他融合 或 非融合蛋白的純化 (3/3) 立即可用的 HiTrap 柱 應(yīng)用： 基團(tuán)特異填料 預(yù)裝柱 白蛋百 , 多種核酸依賴酶 , HiTrap Blue 凝血因子 , DNA 結(jié)合蛋白 , a2巨球蛋白 外露氨基酸 : His (Cys, Trp) HiTrap Chelating 的蛋白和多肽 . a2巨球蛋白和干擾素 生物素和含生物素物質(zhì) HiTrap Streptavidin 凝血因子 , 脂蛋白酶， HiTrap Heparin 膽固醇受體 , 激素 , DNA結(jié)合蛋白 , 干擾素 ,蛋白質(zhì)合成因子 活化好的親和柱自行掛上配基 HiTrap NHSactivated 偶連一級(jí)氨基 26 其他融合 或 非融合蛋白的純化 ? 準(zhǔn)備配基 (. 抗體 ) ? 準(zhǔn)備柱子 (. NHSactivated HiTrap?) 現(xiàn)成方法 ? 優(yōu)化結(jié)合和洗脫條件 ? 使用針筒，蠕動(dòng)泵，或者 196。KTA? 系統(tǒng) + Purification HiTrap? HiTrap Modules columns columns 快速，高處理量篩選 ? (GST or (His)6 融合蛋白 ) 非?？焖?，一步純化 ? ? (適合大部分融合蛋白 ) 一步純化 ? ? (適合大部分融合蛋白 ) 優(yōu)化以提高純度 ? 常規(guī)實(shí)驗(yàn)，重復(fù)性好 ? 純化后蛋白復(fù)性 ? 32 選擇純化設(shè)備 ? 多步純化 (非融合性蛋白或需要更高純度 ) ? 工藝開發(fā)和優(yōu)化 ? 法規(guī)需要 . GLP/GMP ? 純化工藝放大 ? 轉(zhuǎn)移工藝到更大規(guī)模 使用 196。KTA?explorer 系統(tǒng) : 33 大腸桿菌包涵體表達(dá) (His)6 融合蛋白的擴(kuò)增，純化和復(fù)性 詳細(xì)步驟 34 過程 細(xì)胞培養(yǎng) 收獲細(xì)胞 細(xì)胞破碎 離心 5 10 000g 沉淀物 沖洗和離心 分離包涵體 HiTrap? Chelating ＋ Ni2+ 純化和復(fù)性 溶解 35 ? 每 100 ml 培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞沉淀物於 4
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