如何正確設計從生物樣品中分離純化生物大分子(編輯修改稿)
2025-02-09 20:56 本頁面
【文章內容簡介】 新調整核酸的濃度；去除溶液中某些鹽離子與雜質。常用方法如下： ? 鹽溶液沉淀 ：如 MgCl2； NaAc； KAc等。 ? 有機溶劑沉淀 ：如乙醇；異丙醇；聚乙二醇（ PEG）；精胺等。 ? 低溫長時間沉淀，易導致鹽與 DNA共沉淀，影響以后的實驗。一般使用 0℃ 冰水， 1015min， DNA樣品足 可達到實驗要求。 ? 測定 ：一般選用 紫外分光光度法 或 溴乙錠熒光法 測定核酸的含量。 ? 保存 ：對 DNA和 RNA有 不同的保存方式 ： ? 對 DNA： DNA樣品溶于 TE， 4 ℃ 或 20 ℃ 保存；長期保存樣品中可加入 1滴氯仿。 ? 對 RNA： RNA樣品溶于 mol/L NaAc ()或雙蒸滅菌水中，70 ℃ 保存；長期保存可以沉淀形式貯于乙醇中；在 RNA溶液中，加 1滴 mol/L氧釩核糖核苷復合物凍貯于 70℃, 可保存數(shù)年。 的分離純化： I. 注意 ：組織破碎的方法會影響提取的脂質的濃度，因此分析的時候必須將 各種破碎方法進行比較 。 II. 操作方法 ：按照 Folch method法 進行操作： ? 先配制 氯仿 /甲醇 =2/1（ v/v），取組織按 1： 20的量和 氯仿 /甲醇 一起組織均漿，分層后在室溫下在搖床中搖動 1520分鐘 。 ? 均漿通過 濾紙過濾 或者 離心 獲得液體。 ? 在離心獲得的液體中加入 或者 %的生理鹽水 ，渦旋幾秒鐘混均，然后 2022rpm離心 得到兩相溶液，如果需要的話用甲醇 /水（ 1/1）的將兩相界面洗一到兩次，洗的過程不要讓甲醇 /水與下層混合。 ? 通過離心和虹吸去掉上層后， 下層 氯仿相含有脂質，如果體積在 23ml以下則通過 真空旋轉蒸發(fā)器 或 在氮氣 下濃縮。 ? 二氯甲烷可以替代氯仿，結果表明二氯甲烷 /甲醇能夠取代氯仿 /甲醇，因此能夠避免氯仿帶來的健康、安全和管理問題。 的分離純化 a. 單、雙糖 ：常見的單、雙糖一般采用 合成 的方式。制備如下：脫脂 → 去雜 → 濃縮 → 再次去雜 →脫色 → 濃縮 → 冷卻 → 結晶（ →進一步純化）。 b. 多糖的分離純化 ： ? 脫脂 ：由于多糖被脂質包圍，通常用 醇或醚回流脫脂 。 ? 提取 ： ? 熱水浸提法 ? 微波輔助提取法 ? 超聲輔助法 ? 索氏提取法 ? 醇提法 ? 其它方法（如稀堿液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等） ? 除雜 ： ? 除蛋白質 ：沙維積法（ Sevag法）；三氟三氯乙烷法；三氯醋酸法；酶解法；鹽酸法；其它方法（如加入 5%ZnSO4溶液和飽和 Ba（ OH） 2溶液，振蕩后離心去蛋白，但此方法不夠徹底）。 ? 除色素 ：活性炭除色素；弱堿性樹脂 DEAE纖維素或 DuoliteA－ 7來吸附色素（針對植物色素）；氧化脫色（糖和色素時結合，易被DEAE
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