生物樣品前處理、制備、分離(編輯修改稿)
2025-02-12 18:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，僅讓小分子擴(kuò)散性的選擇性的通過透過膜，把小分子從溶液中分離出去而保留生物大分子的技術(shù)。 ? 應(yīng)用：常用于改換大分子溶液的鹽成分，除去小分子，改變?nèi)軇┏煞值取? 29 透析用器材 ? 透析用器材僅涉及透析膜： ? 常用有動物膜、羊皮紙、火棉膠、玻璃紙以及最近使用的賽璐玢膜都是用纖維或纖維素衍生物制成的。 ? 透析膜的特點(diǎn)： ? 子篩狀多孔膜，只允許小分子溶質(zhì)和溶劑通過，而阻止大分子通過。 ? ，不具有能與溶質(zhì)起作用的基團(tuán)，在水、鹽溶液、稀堿或稀酸中不溶解。 ? 好的再生性。 30 透析膜的處理： ? （一般2030厘米）。 ? 10mmol/L碳酸氫鈉濕潤透析膜并煮沸幾分鐘。 ? 10mmol/LNa2EDTA中煮沸幾分鐘，重復(fù)一次。也可在稍加攪拌下浸泡 30分鐘替代煮沸。 ? 。 ? 20%50%乙醇溶液中，儲存于 4℃ ，以防能分解纖維素的微生物生長。 31 注意事項(xiàng)： *操作時必需戴手套 * 1. 取出透析袋要先用蒸餾水清洗乾淨(jìng)，綁透析袋前要先試裝蒸餾水，看透析袋有沒有蛀孔，會不會有水噴出。 綁透析袋不要太用力拉扯，否則透析袋可能會裂。 2. 一般透析至少要 3 h，至少要換兩次透析液 (100 至 1000 倍樣本體積 ) 才能完全。 3. 注意離心濃縮管的離心轉(zhuǎn)速不能太快，否則薄膜很容易破裂。 4. 每次離心濃縮後，暫時不要丟掉外濾液 (filtrate)，收集起來以防薄膜破裂流失。 32 5. 生物樣品的濃縮 ? 概念 ：從低濃度的溶液中除去水或溶劑使之變?yōu)楦邼舛热芤旱倪^程。生物樣品的制備，提取后往往先要進(jìn)行濃縮，然后再進(jìn)行干燥和結(jié)晶。 ? 方法 ： ? 。 ? ，適于濃縮生物大分子。 ? ，溶質(zhì)被吸附后，再用少量液體洗脫、分部收集能使所需要物質(zhì)的濃度提高幾倍以至幾十倍。 ? 、加沉淀劑、溶劑萃取、親和層析等方法也能達(dá)到濃縮的目的。我們只介紹蒸發(fā)濃縮。 33 蒸發(fā) ? 概念 ： 溶液表面的水和溶劑分子獲得的動能超過溶液內(nèi)分子間的吸引力以后，脫離液面進(jìn)入空間的過程。 ? 常用方法 ： ? ? ? 34 常壓蒸發(fā)及常壓蒸發(fā)裝置 ? 原理： 在常壓下加熱使溶劑揮發(fā)，達(dá)到濃縮目的。 ? 方法簡單，適于濃縮耐熱樣品。 ? 所用裝置為蒸發(fā)皿和玻璃蒸餾器。 35 減壓蒸發(fā)及減壓蒸發(fā)裝置 ? 原理： 通過減壓使液面壓力降低，而壓力降低，沸點(diǎn)降低，蒸發(fā)速度加快。 ? 應(yīng)用： 適于濃縮不耐熱的樣品。、 36 常用減壓蒸發(fā)裝置 ? ：在常壓蒸發(fā)用蒸餾器上加真空泵。 37 常用減壓蒸發(fā)裝置 ? ：又稱為旋轉(zhuǎn)濃縮儀。它采用了旋轉(zhuǎn)燒瓶，燒瓶由電機(jī)驅(qū)動緩慢旋轉(zhuǎn)，液體在燒瓶內(nèi)壁展開成膜溶劑得以迅速擴(kuò)散蒸發(fā)，可防止溶液爆沸，蒸發(fā)率成倍提高。 38 6. 生物樣品的干燥及器材 ? 干燥： 除掉潮濕的固體、膏狀物、濃縮液和液體樣品中的水分及溶劑的過程。 ? 目的： 提高樣品的穩(wěn)定性，以供進(jìn)一步的保存分析。 ? 方法： ? ? ? 39 常壓吸收干燥器材 ? 常壓干燥是指在密閉的空間或干燥器內(nèi)使用干燥劑進(jìn)行的干燥。 40 常用干燥劑及性能 ： ： 中性，價(jià)廉，吸水量大，但作用慢，效力差。 ： 中性，效力中等，作用快，吸水量大。 ： 作用快，效率高。與有機(jī)物不發(fā)生反應(yīng)，不溶于 有機(jī)溶劑，缺點(diǎn)是吸水量小，可用于二次干燥。 （或鈉） ： 可吸收水、氨和胺類。鉀比鈉的吸水 能力大 6080倍。 ： 吸水、效力最高、作用非常快，但價(jià)格較貴。 ： 即生石灰，堿性，吸水后成為不溶的氫氧化物，價(jià)廉 ： 泛指具有均一微孔而能選擇的吸附直徑小于其孔徑的分子的那些吸附劑。如沸石分子篩，碳分子篩等，其中常用沸石分子篩。 41 常用干燥劑及其作用 干 燥 劑 吸收的溶劑或其他雜質(zhì) 無水 Na2SO MgSO4 、 CaSO4 、 硅膠 水 CaO 水、乙酸、氯化氫 KOH、 NaOH 水、乙酸、氯化氫、酚、醇 無水 CaCl P2O5 水、醇 石蠟刨片 醇、醚、石油醚、苯、甲苯、氯仿、四氯化碳 42 真空干燥 ? 原理 ：在抽真空的容器中壓力降低則溶劑的沸點(diǎn)也就降低，蒸發(fā)速度加快。 ? 適用于干燥不耐熱的樣品。 ? 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)?？衫玫慕M合器材有： 真空干燥器（箱）、冷凝管及真空泵。 43 真空干燥器（箱） ? 。 ? .以上蓋推不動即可 . ? ，一般先須作耐壓試驗(yàn)。 ? ，干燥器外應(yīng)罩鐵絲網(wǎng)或用布包扎。 ? 快，以免沖散樣品。也可在通氣口處放一小片潔凈濾紙。 ? ，待干燥物所含溶劑不止一種時，可在干燥器內(nèi)同時放兩種干燥劑。 44 冷凍干燥 ? 概念 ： 亦稱 “ 凍干 ” ，即先將溶液或混懸液冷凍成固態(tài)，然后在低溫和高真空度下使冰升華，留下干燥物質(zhì)的過程。 ? 原理 ： 水有固態(tài)、液態(tài)、氣態(tài)三種態(tài)相。根據(jù)熱力學(xué)中的相平衡理論，隨壓力的
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