電子顯微鏡生物樣品的制備與觀察(編輯修改稿)
2024-09-13 14:36 本頁面
【文章內容簡介】 中，置40℃烘箱使干燥。 透射電鏡樣品的制備方法很多，如超薄切片法、復型法、冰凍蝕刻法、滴液法等。其中滴液法，或在滴液法基礎上發(fā)展出來的其他類似方法如直接貼印法、噴霧法等主要被用于觀察病毒粒子、細菌的形態(tài)及生物大分子等。而由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等元素組成，散射電子的能力很低，在電鏡下反差小，所以在進行電鏡的生物樣品制備時通常還須采用重金屬鹽染色或金屬鹽噴鍍等方法來增加樣品的反差，提高觀察效果。例如負染色法就是用電子密度高，本身不顯示結構且與樣品幾乎不反應的物質（如磷鎢酸鈉或磷鎢酸鉀）來對樣品進行“染色”。由于這些重金屬鹽不被樣品萬分所吸附而是沉積到樣品四周，如果樣品具有表面結構，這種物質還能穿透進表面上凹陷的部分，因而在樣品四周有染液沉積的地方，散射電子的能力強，表現為暗區(qū)，而在有樣品的地方散射電子的能力弱，表現為亮區(qū)。這樣便能把樣品的外形與表面結構清楚地襯托出來。負染色法由于操作簡單，目前在進行透射電鏡生物樣品制片時比較常用。本實驗將主要介紹采用滴液法結合負染色技術觀察細菌及核酸分子的形態(tài)。（1）細菌的電鏡樣品制備①將適量無菌水加入生長良好的細菌斜面內，用吸管輕輕撥動菌體制成菌懸液。用無菌濾紙過濾，并調整濾液中的細胞濃渡為108~109個/亳升。②取等量的上述菌懸液與等量的2%的磷鎢酸鈉水溶液混合，制成混合菌懸液。③用菌毛細吸管吸取混合菌懸液滴在銅網膜上。④經3~5分鐘后，用濾紙吸去余水，待樣品干燥后，置低倍光學顯微鏡下檢查，挑選膜完整、菌體分布均勻的銅網。有時為了保持菌體的原有形狀，常用戊二醛、甲醛、鋨酸蒸氣等試劑小固定后再進行染色。其方法是將用無菌水制備好的菌懸液經過過濾，然后向濾液中加幾滴固定液（，%的戊二醛磷酸緩沖液），經這樣預先稍加固定后，離心，收集菌體，再用無菌水制成菌懸液，并調整細胞濃度為108109個/毫升。然后按上述方法染色。（2）核酸分子的電鏡樣品制備核酸分子鏈一般較長，采用普通的滴液或噴霧法易使其結構受到破壞，因此目前多采用蛋白質分子膜技術來進行核酸分子樣品的制備。其原理是：很多球狀蛋白均能在水溶液或鹽溶液的表面形成不溶的變性薄膜，在適當的條件下這一薄膜可以成為單分子層，由伸展的肽鏈構成一個分子網。當核酸分子與該蛋白質單分子膜作用時，會由于蛋白
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