電子顯微鏡生物樣品的制備與觀察(參考版)
2024-08-28 14:36本頁面
【正文】 將樣品放在真空鍍膜機內(nèi)，把金噴鍍到樣品表面后，取出樣品在掃描電鏡中進行觀察。目前用得最多的置換劑是二氧化碳。此時的溫度及壓力即稱為臨界點。其原理是在一裝有溶液的密閉容器中，隨著溫度的升高，蒸發(fā)速率加快，氣相密度增加，液相密度下降。水是脫掉了，但樣品還是浸潤在溶劑中，還必需在表面張力盡可能小的情況下將這些溶劑“請”出去，使樣品真正得到干燥。將上述制備的樣品置于臨界點干燥器中，浸泡于液態(tài)二氧化碳中，加熱到臨界點溫度（，）以上，使之氣化進行干燥。另一種與之類似的樣品制備方法是采用離心洗滌的手段將菌體依次固定及脫水，最后涂布到玻片上。%的同一緩沖液沖洗，用40%、70%、90%和100%的乙醇分別依次脫水，每次15min。而采用水溶性、低表面張力的有機溶液如乙醇等對樣品進行梯度脫水，也是為了在對樣品進行干燥處理時盡量減少由表面張力引起的其自然形態(tài)的變化。因此，在進行掃描電鏡微生物樣品制備時一般都需采用固定、脫水、干燥及表面鍍金等處理步驟。將載有樣品的銅網(wǎng)置于透射電鏡中進行觀察。④將載有單分子膜的載網(wǎng)置于103105mol/L的醋酸鈾乙醇溶液中染色約30s（此步可在用乙醇脫水時同時進行），或用旋轉(zhuǎn)投影的方法將金屬噴鍍于核酸樣品的表面。③單分子膜形成后，用電鏡鑷子取一覆有支持膜的載網(wǎng)，使支持膜朝下，并用鑷子即刻撈起，單分子膜即吸附于支持膜上。在單分子膜形成時整個裝置最好用玻璃罩等物蓋住，以防操作人員的呼吸和旁人走動等引起氣流的影響以及灰塵等臟物的污染。理論計算及實驗證明，當(dāng)1mg的蛋白質(zhì)展開成良好的單分子膜時，其面積約為1cm2，因而可根據(jù)最后形成的單分子膜面積的大小估計其好壞程度。載玻片傾斜的角度決定了展開液下滑至下相溶液的速度，并對單分子膜的形成質(zhì)量有影響，經(jīng)驗證明傾斜度以150左右為宜。②在一干凈的平皿中注入一定下相溶液（），并在液面上加入少量滑石粉?？捎谜归_法、擴散法、一步稀釋法等使核酸吸附到蛋白質(zhì)單分子膜上，本實驗采用展開法。當(dāng)核酸分子與該蛋白質(zhì)單分子膜作用時，會由于蛋白質(zhì)的氨基酸堿性側(cè)鏈基團的作用，使得核酸從三維空間結(jié)構(gòu)的溶液構(gòu)型吸附于肽鏈網(wǎng)而轉(zhuǎn)化為二維空間的構(gòu)型，并從形態(tài)到結(jié)構(gòu)均能保持一定程度的完整性。（2）核酸分子的電鏡樣品制備核酸分子鏈一般較長，采用普通的
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