生物樣品前處理、制備、分離-展示頁
2025-01-25 18:59本頁面
【正文】 電動組織搗碎機(jī) ? 應(yīng)用：一般用于動物組織，植物肉質(zhì)種子，柔嫩的葉、芽等材料。 8 ? 1)電動組織搗碎機(jī) 9 電動組織搗碎機(jī) ? 原理：用可調(diào)速電機(jī)驅(qū)動搗碎轉(zhuǎn)子（頭）在高速旋轉(zhuǎn)下將組織打碎達(dá)到勻漿目的。 3) 酶解法：利用各種水解酶，如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶和酯酶等，于 37℃ ， pH8，處理 15分鐘，可以專一性地將細(xì)胞壁分解。 7 (3)化學(xué)與生物化學(xué)方法 1) 自溶法：將新鮮的生物材料存放于一定的 pH和適當(dāng)?shù)臏囟认?，?xì)胞結(jié)構(gòu)在自身所具有的各種水解酶（如蛋白酶和酯酶等）的作用下發(fā)生溶解，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。 4) 冷熱交替法：從細(xì)菌或病毒中提取蛋白質(zhì)和核酸時可用此法。 3) 壓榨法：這是一種溫和的、徹底破碎細(xì)胞的方法。 2) 超聲波處理法：此法是借助超聲波的振動力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器。 2) 組織搗碎器：這是一種較劇烈的破碎細(xì)胞的方法，通?？上扔眉矣檬称芳庸C(jī)將組織打碎，然后再用10000r/min～ 20220r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機(jī) (即高速分散器 )將組織的細(xì)胞打碎。 5 細(xì)胞的破碎 不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細(xì)胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細(xì)胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素、半纖維素組成的細(xì)胞壁，要采取專門的細(xì)胞破碎方法。 （ 6）生物材料如暫不提取，應(yīng)冰凍保存。 （ 4）植物要先去殼、除脂。 （ 2）選擇的材料應(yīng)含量高、來源豐富、制備工藝簡單、成本低，盡可能保持新鮮，盡快加工處理。 4 2. 生物大分子制備的前處理 生物材料的選擇 （ 1）制備生物大分子，首先要選擇適當(dāng)?shù)纳锊牧稀? ⑤分離純化方案的選擇和探索，這是最困難的過程。 ③通過文獻(xiàn)調(diào)研和預(yù)備性實(shí)驗(yàn)，掌握生物樣品及產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)。 3 生物樣品的處理制備通?？砂匆韵虏襟E進(jìn)行： ①確定要制備的生物樣品的目的和要求，是進(jìn)行科研、開發(fā)還是要發(fā)現(xiàn)新的物質(zhì)。 ⑶許多生物樣品一旦離開了生物體內(nèi)的環(huán)境時就極易失活，因此分離過程中如何防止其失活，就是生物樣品提取制備最困難之處。1 生物樣品前處理、制備、分離及保存器材 中國刑警學(xué)院法醫(yī)系 2 1. 概 述 生物樣品處理制備的主要特點(diǎn)： ⑴生物材料的組成極其復(fù)雜，常常包含有數(shù)百種乃至幾千種化合物。 ⑵許多生物樣品在生物材料中的含量極微，分離純化的步驟繁多，流程長。 ⑷生物樣品的制備幾乎都是在溶液中進(jìn)行的，溫度、 pH值、離子強(qiáng)度等各種參數(shù)對溶液中各種組成的綜合影響，很難準(zhǔn)確估計和判斷。 ②建立相應(yīng)的可靠的分析測定方法，這是進(jìn)行生物樣品制備的關(guān)鍵。 ④生物材料的破碎和預(yù)處理。 ⑥產(chǎn)物的濃縮，干燥和保存。材料的來源無非是動物、植物和微生物及其代謝產(chǎn)物。 （ 3）動物組織要先除去結(jié)締組織、脂肪等非活性部分，絞碎后在適當(dāng)?shù)娜軇┲刑崛?，如果所要求的成分在?xì)胞內(nèi)，則要先破碎細(xì)胞。 （ 5）微生物材料要及時將菌體與發(fā)酵液分開。動物材料則需深度冷凍保存。 細(xì)胞破碎方法 (1)機(jī)械法 1) 研磨：將剪碎的動物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿。 6 (2)物理法 1) 反復(fù)凍融法：將待破碎的細(xì)胞冷至－ 15℃ 到－ 20℃ ，然后放于室溫 (或 40℃) 迅速融化，如此反復(fù)凍融多次，由于細(xì)胞內(nèi)形成冰粒使剩余胞液的鹽濃度增高而引起細(xì)胞溶脹破碎。多用于微生物材料，處理時間有數(shù)分鐘到數(shù)十分鐘不等，破碎細(xì)菌和酵母菌時，時間要長一些。在 1000 105Pa～ 2022 105Pa 的高壓下使細(xì)胞懸液通過一個小孔突然釋放至常壓，細(xì)胞將徹底破碎。在 90℃ 左右維持?jǐn)?shù)分鐘，立即放入冰浴中使之冷卻，如此反復(fù)多次，絕大部分細(xì)胞可以被破碎。 2) 溶脹法：細(xì)胞膜為天然的半透膜，在低滲溶液和低濃度的稀鹽溶液中，由于存在滲透壓差，溶劑分子大量進(jìn)入細(xì)胞，將細(xì)胞膜脹破釋放出細(xì)胞內(nèi)含物。 4) 有機(jī)溶劑處理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶劑或 SDS（十二烷基硫酸鈉）等表面活性劑處理細(xì)胞，可將細(xì)胞膜溶解，從而使細(xì)胞破裂，此法也可以與研磨法聯(lián)合使用。 ? 市售儀器多數(shù)是可調(diào)速機(jī)型，有不同口徑、頭端式樣的轉(zhuǎn)子供選擇，平頭轉(zhuǎn)子適于制備乳濁液及懸浮液，鋸齒狀轉(zhuǎn)子適于制備組織和含纖維物質(zhì)的勻漿。國產(chǎn)的搗碎機(jī)最高轉(zhuǎn)速可達(dá) 12萬轉(zhuǎn) /分，因旋轉(zhuǎn)刀刃的機(jī)械切力很大，制備較大分子樣品很少使用。 11 2）超聲波細(xì)胞破碎機(jī) 12 超聲波細(xì)胞破碎機(jī) ? 原理： 儀器發(fā)出一定頻率的超聲波產(chǎn)生振動力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器。 ? 相應(yīng)超聲換能器的長度及尖端口徑也可挑選不同長短、粗細(xì)，以滿足 ~250ml的容量需要。 14 超聲波細(xì)胞破碎機(jī) ? 使用注意事項(xiàng)： ? ，注意降溫，可采用間歇處理方法（ 1030秒）和冷卻夾套選件。 ? ，須用蒸餾水沖洗凈換能器頭端 。 15 3）加壓細(xì)胞破碎機(jī) ? 原理 ：利用高壓使細(xì)胞懸液通過一個小孔（小于細(xì)胞直徑的孔徑）致使細(xì)胞被擠破、壓碎，特別適用于厚壁細(xì)胞、細(xì)菌和較濃樣品的破碎，具有快速、方便、無噪聲的特點(diǎn)。 ? 目的： ? 1）去除不溶性雜質(zhì)得到所需要的清液
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