南農生物分離工程生物分離7親和(編輯修改稿)
2025-02-09 12:34 本頁面
【文章內容簡介】 溶液中，固定化組氨酸的親和吸附作用最強，隨著鹽濃度增大，親和吸附作用降低。 9. 肝素 ? 肝素 （ heparin） 是存在于哺乳動物的肝 、 肺 、腸等臟器中的酸性多糖類物質 ， 分子量一般為 5至 30 kD， 具有抗凝血作用 。 ? 肝素與脂蛋白 、 脂肪酶 、 甾體受體 、 限制性核酸內切酶 、 抗凝血酶 、 凝血蛋白質等具有親和作用 ， 可用作這些物質的親和配基 。 ? 肝素的親和結合作用在中性 pH和低濃度鹽溶液中較強 ， 隨著鹽濃度的增大結合作用降低 。 ? 親和色譜填料載體 ? 親和色譜的理想載體應具有下列特性： ①不溶性； ②滲透性； ③高硬度及適當?shù)念w粒形式； ④最低的吸附力； ⑤較好的化學穩(wěn)定性； ⑥抗微生物和酶的侵蝕； ⑦親水性； ⑧具有大量的供反應的化學基團。 ? 常規(guī)的親和色譜填料都是以軟質凝膠，諸如葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺等作為載體材料的。 ? 近年來，為了滿足快速高效分離的需要，以多孔硅膠和合成高分子化合物為載體的高效 AFC色譜填料，得以迅速發(fā)展。 ? 親和色譜填料的制備過程一般包括： 載體（ carrier、 support）的選擇、載體的活化和配基的連接。 親和吸附載體的種類 種類 組成 性能 多孔玻璃載體 硅酸鹽 堅硬、耐酸堿、易修飾 聚丙烯酰胺 凝膠載體 丙烯酰胺 N,N亞甲基雙丙烯酰胺 親水性好 可供活化基團多 纖維素載體 多糖類物質 來源豐富，但非特異性吸附及空間位阻強，對分離不利 葡聚糖凝膠載體 經環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)的多糖類 理化性質穩(wěn)定，但粒徑太小 常用載體 1. 纖維素 活化后帶電荷，非特異性吸附強，結構緊密， 小分子配基親和位阻大 , 分離與核酸有關的物質（ oligo)dT mRNA 2. 瓊脂糖凝膠 Sepharose 4B最佳，活性基團多，孔徑大， 幾乎無帶電基團，交聯(lián)后穩(wěn)定性 ↑ 3. 葡聚糖凝膠 孔徑小， G200通過 105級，配基偶聯(lián)后， 膨脹度 ↓，表面親和病毒、細胞 4. 聚丙烯酰胺凝膠 較多酰胺基，配基偶聯(lián)后網格縮小 pH211，理化穩(wěn)定，避免接觸強氧化劑 5. 多孔玻璃珠（ BioGlass) 理化穩(wěn)定，親水性不強，非特異性吸附， 化學活性基團少 克服：商品連接氨烷基，葡聚糖包被 ? 部分商品化的色譜填料 表 52 部分商品化的色譜填料 影響親和力的因素 ? 配基濃度 （ 解離常數(shù) ） 配基濃度高有利 , 低親和力系統(tǒng)：配基濃度 ↑配體濃度 ↑ 高親和力系統(tǒng) : 配基濃度大不利 空間障礙 ? 對于親和力低，分子量特大的親和對，小分子配基， 加手臂 活化方法引入活性基團，起到間隔臂作用 C6烴鏈，＞ C8親和力下降 ? 配基與載體結合位點 多肽、蛋白作配基，以 最少鍵 與載體連接 以 εNH2表面，較低 pH減少連接點， PH＞ 胰島素： ， 2個 NH2連，親和力 1/10 ， 1個 NH2連， ? 載體孔徑 排阻限至少大于配體分子量 1個數(shù)量級 配基和大分子（抗原抗體）親和力高或配體很大 （細胞器、完整細胞），多孔不重要，在表面 配體 Biogel P300 (300000) Sepharose 4B
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