生物分離工程第八章沉析(編輯修改稿)
2025-02-12 11:56 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 析用鹽的用量選擇 ? 飽和度（ Saturation）的概念： 配制飽和硫酸銨溶液（ SAS） 767g (NH 4 )2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調(diào)到硫酸 。此即飽和度為 100% 的硫酸銨溶液 ( mol/L, 25 oC). 有機(jī)溶劑沉淀 ? 概念： 在含有溶質(zhì)的水溶液中加入一定量親水的 有機(jī)溶劑 ，降低溶質(zhì)的溶解度，使其沉淀析出。 ? 原理： 傳統(tǒng)觀點(diǎn)：（ 1） 降低了溶質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)之間的靜電引力增加，從而出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，導(dǎo)致沉淀。 （ 2）由于有機(jī)溶劑的水合作用，降低了自由水的濃度，降低了親水溶質(zhì)表面水化層的厚度，降低了親水性，導(dǎo)致脫水凝聚。 新觀點(diǎn) ： 有機(jī)溶劑可能破壞蛋白質(zhì)的某種鍵，使其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某種變化，疏水區(qū)暴露并與有機(jī)溶劑疏水基團(tuán)結(jié)合形成疏水層，從而使蛋白沉淀（缺點(diǎn)：蛋白變性） 常用的有機(jī)溶劑沉析劑 ? 乙醇：沉析作用強(qiáng)，揮發(fā)性適中，無(wú)毒 ， 常用于蛋白質(zhì)、核酸、多糖等生物大分子的沉析； ? 丙酮 ：沉析作用更強(qiáng)，用量省，但毒性大，應(yīng)用范圍不廣； ? 特點(diǎn)： – 介電常數(shù)小， 60%乙醇的介電常數(shù)是 48 丙酮的介電常數(shù)是 22 – 容易獲取 有機(jī)溶劑沉析的特點(diǎn) ? 分辨率高； ? 溶劑容易分離，并可回收使用； ? 產(chǎn)品潔凈； ? 容易使蛋白質(zhì)等生物大分子失活； – 應(yīng)注意在低溫下操作； ? 成本高 溶劑選擇 ? 介電常數(shù)要小 ? 致變性作用要小（ 甲醇 ） ? 毒性要小、揮發(fā)性適中 ? 水溶性要好 影響有機(jī)溶劑沉析的主要因素 ? 溫度：低溫有利于防止溶質(zhì)變性；有利于提高收率（溶解度下降）； ? 攪拌速度：散熱 ? 溶液 pH值：原則是避免目標(biāo)蛋白與雜質(zhì)帶有相反的電荷，防止共沉現(xiàn)象。（ pI） ? 離子強(qiáng)度 :離子強(qiáng)度低有利于沉析， ~? 樣品濃度 : ~2% – ?。喝軇┯昧看螅厥章实?，但共沉淀作用小 – 濃：節(jié)省溶劑用量，共沉作用強(qiáng)，分辨率低 ? 金屬離子的助沉析作用： Zn2+、 Ca2+ 等電點(diǎn)沉淀 ? 原理： 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，當(dāng)溶液 pH值處于等電點(diǎn)時(shí)，分子表面凈電荷為 0，雙電層和水化膜結(jié)構(gòu)被破壞，由于分子間引力，形成蛋白質(zhì)聚集體，進(jìn)而產(chǎn)生沉淀。 ? 概念： 調(diào)節(jié)體系 pH值，使兩性電解質(zhì)的溶解度下降，析出的操作稱為 等電點(diǎn)沉淀 。 ? 由于在等電點(diǎn)附近，溶質(zhì)仍然有一定的溶解度，等電點(diǎn)沉淀法往往不能獲得高的回收率，因此等電點(diǎn)沉淀法通常與鹽析、有機(jī)溶劑沉淀法聯(lián)合使用 ? 操作時(shí)的注意事項(xiàng)： （ 1）由于無(wú)機(jī)離子的影響，蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)通常會(huì)發(fā)生“漂移”，陽(yáng) 高，陰 低 （ 2）溶質(zhì)的穩(wěn)定性 （ 3）鹽析效應(yīng) 其它沉淀法 ? 水溶性非離子型聚合物沉淀劑 ?
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