生物化學(xué)技術(shù)1生命大分子物質(zhì)的制備(編輯修改稿)
2025-02-12 06:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一、機械破碎 ： 將剪碎的動物組織置研缽中，用研磨棒研 磨。為提高研磨效率，也可加入一定量的石 英砂（注意“吸附”）。大規(guī)模生產(chǎn)時，可 用電動研磨法（如球磨機） 此法為 溫和破碎，適用于動物細胞和細菌細胞的破碎 ： 搗碎器（ 8000~10000r/min）處理 30~45S, 植物和動物細胞可完全破碎，但對微生物需加石英砂才有效；注意必須低溫搗碎，以防溫度升高引起有效成分變性，因此時間不宜過長 —— 劇烈方法 ： 利用超聲波破碎細胞壁和細胞器的有效方法，時間一般較長，（ 5~10min或更長。為防止電器長時間運轉(zhuǎn)產(chǎn)熱，一般采用間歇處理和降溫破碎法 ） ： 用高壓（高于 1000倍以上大氣壓的壓力）迫使幾十毫升細胞懸液通過一個小孔（孔徑＜細胞直徑），使細胞被擠破 ： 將細胞反復(fù)速凍（低溫）速融（高溫，如 40℃ ），使細胞破碎 二、溶脹和自溶 ?溶脹：將細胞置低滲環(huán)境中，細胞水腫、脹裂，釋出胞內(nèi)溶物 如：紅細胞置蒸餾水中會迅速溶脹破裂而釋放血紅素 ?自溶：細胞在本身具有的水解酶（如蛋白酶、酯酶 類 ）作用下，發(fā)生溶解的現(xiàn)象（如尸體的腐化） 此法要注意酶對有效成分是否有分解作用 三、化學(xué)處理 運用脂溶性溶劑（如丙酮、氯仿、甲苯等）或表面活性劑（如 SDS等）處理細胞時，可溶解細胞壁、細胞膜的部分結(jié)構(gòu)，使細胞內(nèi)的酶、 DNA等物質(zhì)釋放出來 四、生物酶降解 生物酶（如溶菌酶等）能降解細胞壁。在用此法處理細菌細胞壁時，先是細胞壁消化降解，然后由于滲透壓差引起細胞膜破裂，最后導(dǎo)致細胞完全破碎 如從細菌細胞中提取質(zhì)粒 DNA時，很多方法都是采用了加溶菌酶破壁 第四節(jié) 抽 提 ?含義： 抽提通常是指用適當?shù)?溶劑 和方法，從原料中把有效成分分離出來的過程 ?一般理想的抽提溶劑應(yīng)具備下述條件 ? 對有效成分溶解度大 ， 破壞作用小 ? 對雜質(zhì)不溶解或溶解度很小 ? 來源廣泛 、 價格低廉 、 操作安全等 一、 抽提的含義 對不同組織抽提的具體 抽提方法 可參閱有關(guān)文獻 二、影響抽提的因素 （一） pH值 抽提溶劑 pH值對有效成分的穩(wěn)定性和抽提效率都有極大影響。對于兩性電解質(zhì)成分的提取，一般選擇 pH值偏離等電點的穩(wěn)定范圍內(nèi)抽提 如肝素提取時，在酸性 pH范圍內(nèi)易受破壞，且不易與脂蛋白分離；而在堿性 pH范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)帶負電荷，不能與帶強負電荷的肝素形成離子鍵而分離。故選擇 ~11的高堿性 注意： 調(diào)抽提液 pH時，一般 pH用弱酸（ HCL）調(diào)節(jié)說，應(yīng)及時攪拌均勻，如果攪拌不均，以免局部 pH過高或過低而引起所需成分變性 （二）溶劑的極性和離子強度 ?調(diào)節(jié)溶劑極性的方法 :增加極性 — 加蔗糖或甘油 降低極性 — 加 DMSO或二甲基甲酰胺
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