生物化學(xué)技術(shù)1生命大分子物質(zhì)的制備(編輯修改稿)
2025-02-12 06:49 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 一、機(jī)械破碎 ： 將剪碎的動(dòng)物組織置研缽中，用研磨棒研 磨。為提高研磨效率，也可加入一定量的石 英砂（注意“吸附”）。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，可 用電動(dòng)研磨法（如球磨機(jī)） 此法為 溫和破碎，適用于動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)菌細(xì)胞的破碎 ： 搗碎器（ 8000~10000r/min）處理 30~45S, 植物和動(dòng)物細(xì)胞可完全破碎，但對(duì)微生物需加石英砂才有效；注意必須低溫?fù)v碎，以防溫度升高引起有效成分變性，因此時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng) —— 劇烈方法 ： 利用超聲波破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器的有效方法，時(shí)間一般較長(zhǎng)，（ 5~10min或更長(zhǎng)。為防止電器長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)轉(zhuǎn)產(chǎn)熱，一般采用間歇處理和降溫破碎法 ） ： 用高壓（高于 1000倍以上大氣壓的壓力）迫使幾十毫升細(xì)胞懸液通過(guò)一個(gè)小孔（孔徑＜細(xì)胞直徑），使細(xì)胞被擠破 ： 將細(xì)胞反復(fù)速凍（低溫）速融（高溫，如 40℃ ），使細(xì)胞破碎 二、溶脹和自溶 ?溶脹：將細(xì)胞置低滲環(huán)境中，細(xì)胞水腫、脹裂，釋出胞內(nèi)溶物 如：紅細(xì)胞置蒸餾水中會(huì)迅速溶脹破裂而釋放血紅素 ?自溶：細(xì)胞在本身具有的水解酶（如蛋白酶、酯酶 類 ）作用下，發(fā)生溶解的現(xiàn)象（如尸體的腐化） 此法要注意酶對(duì)有效成分是否有分解作用 三、化學(xué)處理 運(yùn)用脂溶性溶劑（如丙酮、氯仿、甲苯等）或表面活性劑（如 SDS等）處理細(xì)胞時(shí)，可溶解細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的部分結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞內(nèi)的酶、 DNA等物質(zhì)釋放出來(lái) 四、生物酶降解 生物酶（如溶菌酶等）能降解細(xì)胞壁。在用此法處理細(xì)菌細(xì)胞壁時(shí)，先是細(xì)胞壁消化降解，然后由于滲透壓差引起細(xì)胞膜破裂，最后導(dǎo)致細(xì)胞完全破碎 如從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒 DNA時(shí)，很多方法都是采用了加溶菌酶破壁 第四節(jié) 抽 提 ?含義： 抽提通常是指用適當(dāng)?shù)?溶劑 和方法，從原料中把有效成分分離出來(lái)的過(guò)程 ?一般理想的抽提溶劑應(yīng)具備下述條件 ? 對(duì)有效成分溶解度大 ， 破壞作用小 ? 對(duì)雜質(zhì)不溶解或溶解度很小 ? 來(lái)源廣泛 、 價(jià)格低廉 、 操作安全等 一、 抽提的含義 對(duì)不同組織抽提的具體 抽提方法 可參閱有關(guān)文獻(xiàn) 二、影響抽提的因素 （一） pH值 抽提溶劑 pH值對(duì)有效成分的穩(wěn)定性和抽提效率都有極大影響。對(duì)于兩性電解質(zhì)成分的提取，一般選擇 pH值偏離等電點(diǎn)的穩(wěn)定范圍內(nèi)抽提 如肝素提取時(shí)，在酸性 pH范圍內(nèi)易受破壞，且不易與脂蛋白分離；而在堿性 pH范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，不能與帶強(qiáng)負(fù)電荷的肝素形成離子鍵而分離。故選擇 ~11的高堿性 注意： 調(diào)抽提液 pH時(shí)，一般 pH用弱酸（ HCL）調(diào)節(jié)說(shuō)，應(yīng)及時(shí)攪拌均勻，如果攪拌不均，以免局部 pH過(guò)高或過(guò)低而引起所需成分變性 （二）溶劑的極性和離子強(qiáng)度 ?調(diào)節(jié)溶劑極性的方法 :增加極性 — 加蔗糖或甘油 降低極性 — 加 DMSO或二甲基甲酰胺
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